口蹄疫病毒VP2蛋白B細(xì)胞線性表位的鑒定.pdf

1、口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。易感動(dòng)物如黃牛、綿羊、山羊和豬等?？谔阋弑皇澜鐒?dòng)物衛(wèi)生組織列為必須通報(bào)的動(dòng)物傳染病。對(duì)口蹄疫的預(yù)防和診斷，需要建立在對(duì)病毒蛋白抗原結(jié)構(gòu)與功能的研究之上。本研究首先利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白，抗原性檢測(cè)結(jié)果表明表達(dá)產(chǎn)物能被Asia1型口蹄疫感染血清所識(shí)別。
　　 為了分析Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的優(yōu)勢(shì)抗原表位區(qū)，設(shè)計(jì)了7個(gè)覆

2、蓋整個(gè)Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的多肽片段，分別進(jìn)行融合表達(dá)，經(jīng)Western blot分析表明只有融合蛋白TrxA-F1（1~44aa）能夠被Asia1型口蹄疫感染血清所識(shí)別，鑒定表明1~44aa為Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細(xì)胞線性抗原表位區(qū)。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)證實(shí)，O型、A型、C型口蹄疫標(biāo)準(zhǔn)血清和感染SAT2型口蹄疫康復(fù)期的牛血清也能識(shí)別表達(dá)的融合蛋白TrxA-F1。為了進(jìn)一步鑒定Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細(xì)胞線性

3、線性抗原表位區(qū)，設(shè)計(jì)了6個(gè)覆蓋F1（1~44aa）的多肽片段，每一個(gè)多肽片段合成一對(duì)寡核酸片段，經(jīng)磷酸化、退火后插入表達(dá)載體pET-32a進(jìn)行融合表達(dá)，表達(dá)的6個(gè)融合蛋白經(jīng)切膠的方法進(jìn)行純化。經(jīng)Western-Blot進(jìn)一步鑒定出了Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細(xì)胞線性抗原表位區(qū)位于N末端的6~15aa區(qū)域。
　　 在鑒定Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的基礎(chǔ)上，對(duì)Asia1型和O型口蹄疫病毒VP2進(jìn)行氨基酸序列的比對(duì)，結(jié)

4、果表明在兩者N末端的1~31氨基酸序列完全一致。所以，可以只針對(duì)O型口蹄疫病毒VP2蛋白32~218 aa進(jìn)行B細(xì)胞抗原表位的鑒定，設(shè)計(jì)了3個(gè)相互重疊的多肽片段覆蓋O型口蹄疫病毒VP2蛋白32~218 aa區(qū)域。經(jīng)克隆表達(dá)，Western blot鑒定在此區(qū)域未鑒定出B細(xì)胞線性抗原表位。
　　 綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，Asia1型和O型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細(xì)胞線性抗原表位區(qū)N末端的6~15aa區(qū)域，而此區(qū)域也是其它血清型口蹄疫病毒