表達(dá)豬β防御素-2和cecropin P1抗菌肽枯草芽孢桿菌的構(gòu)建及特性研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是動(dòng)物腸道中的一種具有代表性的益生菌添加劑，豬β防御素-2（pBD-2）和抗菌肽cecropin P1是豬腸道中重要的兩種抗菌肽，動(dòng)物腸道中的益生菌和抗菌肽在維持腸道菌群平衡，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫以及防御病原菌方面起重要作用。
　　利用基因工程方法制備表達(dá)抗菌肽的益生菌將有利于畜禽的生長(zhǎng)和提高抗病力。本研究試圖制備表達(dá)豬pBD-2和cecropin P1抗菌肽的枯草芽孢桿菌，以提高仔豬抗病

2、力和促進(jìn)仔豬的生長(zhǎng)。為提高抗菌肽的表達(dá)水平，根據(jù)枯草芽孢桿菌偏愛(ài)密碼子對(duì)β防御素-2和cecropin P1基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化，并將優(yōu)化后的β防御素-2和cecropin P1的基因插入到pMK4原核表達(dá)載體Lac啟動(dòng)子下游，構(gòu)建成β防御素-2和cecropin P1基因的融合表達(dá)載體pMK-BD-2/CP1，經(jīng)轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌，篩選出表達(dá)融合抗菌肽的枯草芽孢桿菌工程菌。經(jīng)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)證明構(gòu)建的工程菌能夠表達(dá)豬β防御素-2和cecropin

3、 P1融合抗菌肽，表達(dá)的融合抗菌肽對(duì)工程菌的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯影響。融合抗菌肽經(jīng)腸激酶酶切處理后釋放的pBD-2、cecropin P1對(duì)多種細(xì)菌都具有明顯的抗菌作用，包括革蘭氏陰性菌（大腸桿菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、副豬嗜血桿菌）和革蘭氏陽(yáng)性菌（金黃色葡萄球菌）。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在仔豬基礎(chǔ)日糧中添加此工程菌可明顯促進(jìn)斷奶仔豬的生長(zhǎng)和提高仔豬抗病力。這項(xiàng)研究不僅為該工程菌在養(yǎng)豬業(yè)的應(yīng)用打下了必要的基礎(chǔ)。同時(shí)也為其它重組抗菌肽益生菌的制備提供了重要科學(xué)