鴨副粘病毒分離鑒定、F基因序列分析及生物學(xué)特性研究.pdf

1、鴨副粘病毒病(Duck Paramyxo Virus Disease)是由鴨副粘病毒(DuckParamyxo Virus)引起的一種病毒性急性傳染病。該病以氣管環(huán)出血，肺臟彌漫性出血，脾臟腫大為主要特征。鴨副粘病毒屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)，副粘病毒亞科，腮腺炎病毒屬(Rubulavirus)。長期以來，禽1型副粘病毒不感染水禽，水禽即使帶毒也不發(fā)病。但近年來，該病的流行又呈現(xiàn)出新的特點(diǎn)：高抗體禽群發(fā)生該病，禽l

2、型副粘病毒對水禽的致病力逐漸增強(qiáng)，水禽(鵝、鴨、企鵝等)不再僅是禽1型副粘病毒的宿主和儲存庫，已成為禽1型副粘病毒的易感禽類。其中鵝、鴨的易感性最高，且不同同齡的鵝、鴨均易感，日齡越小，發(fā)病率和死亡率越高，半個月內(nèi)的雛鴨、雛鵝發(fā)病率和死亡率最高。近年來，該病在我國呈上升趨勢，給我國養(yǎng)鴨業(yè)乃至整個養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 2006-2008年在山東地區(qū)部分養(yǎng)鴨場出現(xiàn)鴨子大量死亡現(xiàn)象，本實(shí)驗(yàn)室從來自濰坊、濱州、肥城、東營、泰安、濟(jì)

3、南的鴨病料和鴨胚中分離得到六株鴨副粘病毒。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對這六株副粘病毒的F基因擴(kuò)增后進(jìn)行序列測定，并與傳統(tǒng)疫苗株、標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F48E9和已發(fā)表的24株鴨副粘病毒進(jìn)行同源性比較、進(jìn)化樹分析，旨在從分子生物學(xué)水平闡明山東地區(qū)鴨副粘病毒分離株之間的親緣關(guān)系以及與其它地區(qū)流行株之間的親緣關(guān)系，為該病的預(yù)防和控制提供理論依據(jù)。 本課題分二部分進(jìn)行研究。 第一部分：一株經(jīng)鴨胚傳遞的鴨副粘病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性研究

4、 2008年6月份山東省某種鴨場260同齡的種鴨出現(xiàn)產(chǎn)蛋下降，但未出現(xiàn)死亡，該種鴨群所產(chǎn)種蛋連續(xù)3批在孵化至20～25胚齡時出現(xiàn)約10％的死胚，出殼后雛鴨弱雛較多，部分雛鴨出殼后即出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)為頭頸扭轉(zhuǎn)、角弓反張、斜頸、左右搖擺、站立不穩(wěn)、癱瘓等，剖檢可見腦膜出血、肺臟出血、十二指腸黏膜彌漫性出血。為確定發(fā)病原因，我們對死亡鴨胚、1日齡的病死鴨及出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的雛鴨進(jìn)行了病原的分離、鑒定，確定為副粘病毒，命名為SDFCH株，對該分離

5、株的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。毒力測定結(jié)果表明該病毒雞胚平均致死亡時間(MDT)為56.6 h；1日齡SPF雞腦內(nèi)接種分離病毒致病指數(shù)(ICPI)為1.78；6周齡SPF雞靜脈接種致病指數(shù)(IVPI)為2.59。攻毒雛鴨生長緩慢，精神沉郁，剖檢可見氣管彌漫性出血、肺臟出血、腺胃乳頭出血、胰臟出血、十二指腸黏膜彌漫性出血，個別雛鴨腦膜出。 第二部分：鴨副粘病毒山東株F基因克隆與序列分析 對2006-2008年從山東省不同地區(qū)規(guī)

6、模化鴨場采集的疑似鴨副粘病毒病癥狀的病料進(jìn)行了鴨副粘病毒的分離鑒定及F基因克隆和序列分析，結(jié)果表明F基因的核苷酸序列較穩(wěn)定，不同地區(qū)6株鴨副粘病毒毒株的F基因全基因組序列均由1662bp組成，彼此間核苷酸序列同源性達(dá)95.3％～99.8％，親緣關(guān)系密切；與Genbank已發(fā)表的鴨副粘病毒參考毒株的同源性介于87.4％～97.8％；與Genbank已發(fā)表的鵝副粘病毒參考毒株的同源性介于95.7～98.4％；與傳統(tǒng)的疫苗株Lasota株的同

7、源性在87.7％～88.3％之間；與F48E9的同源性在90.3％～91.0％之間。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明這6株毒株與江蘇、黑龍江、廣東的鵝副粘病毒毒株和鴨副粘病毒毒株親緣性較近，屬于同一分支。本研究對所測定的6株鴨副粘病毒毒株F基因所對應(yīng)的氨基酸序列分析表明：6株毒株之間的氨基酸同源性為95.3％～98.0％；與Genbank已發(fā)表的鴨源副粘病毒的氨基酸同源性為87.4％～97.5％；與鵝源副粘病毒的氨基酸同源性為96.4％～98.4％：