貓杯狀病毒FB-NJ-13株的分離鑒定及生物學特性研究.pdf

1、貓杯狀病毒(Feline calicivirus，F(xiàn)CV)可引發(fā)貓科動物的上呼吸道疾病、口腔水皰性疾病以及慢性胃腸炎等疾病，臨床癥狀表現(xiàn)為口腔潰瘍、鼻炎、結膜炎、慢性胃腸炎、急性關節(jié)炎等，還會導致肺臟、脾臟和胰臟等損傷，嚴重的可導致動物死亡。FCV僅有1個血清型，基因組由3個開放閱讀框編碼，基因表現(xiàn)多樣性。FCV呈世界性分布，且已在一些國家和地區(qū)的珍稀貓科野生動物中分離到了FCV，我國獵豹和虎之間也有流行的報道，給寵物和野生動物的生存帶

2、來了威脅。因此，進行FCV的分離鑒定以及生物學特性的研究可為FCV的流行病學研究、疾病防控和基礎生物學研究提供重要的科學依據。
　　本實驗將疑似感染FCV的貓鼻咽拭子接種于敏感細胞CRFK，盲傳至第3代時CRFK細胞可出現(xiàn)圓縮、脫落等特征性的病變。對分離株進行RT-PCR檢測可以擴增到目的條帶，命名為FB-NJ-13; Eva Green實時熒光定量RT-PCR方法能夠檢測到分離株病毒拷貝數(shù)為2.03×106copies/uL;電

3、鏡下觀察到病毒粒子呈圓球形，沒有囊膜，大小在35～39nm之間，符合FCV的形態(tài)學特征;間接免疫熒光試驗表明分離株可與FCV陽性血清反應，在熒光顯微鏡下能夠看到綠色熒光;測定分離株的病毒滴度為108 TCID50/mL;對分離株進行噬斑純化，獲得了純化的病毒株。本實驗根據GenBank中收錄的FCV全基因組序列，設計了3對引物，對分離株進行全基因組測序，結果表明FB-NJ-13全長7684 bp，并將序列提交至GenBank，登錄號為K

4、M111557。
　　本實驗對FB-NJ-13分離株的理化特性、細胞致病性、全基因組序列和遺傳演化分析以及小鼠致病性等生物學特性進行研究。溫度、酸堿、有機溶劑及干燥和紫外照射等理化特性研究表明，F(xiàn)B-NJ-13株在50℃30 min或70℃5 min可被滅活;在pH3.0和pH10.0以上的環(huán)境中不穩(wěn)定;對氯仿、乙醚等有機溶劑不敏感;經相同時間處理，紫外照射比干燥處理的殺傷作用強。細胞致病性試驗顯示FB-NJ-13對CRFK細胞、

5、Vero細胞、MDCK細胞具有致病性，對DFI細胞、PK15細胞、BHK-21細胞等無致病性。全基因核苷酸序列分析結果顯示，F(xiàn)B-NJ-13與其他33株參考毒株的同源性為76.2％～79.5％，與GD株的同源性最高(79.5％)。分析分離株ORF1、ORF2及ORF3氨基酸序列及系統(tǒng)進化樹知，ORF3氨基酸序列相對保守（82.2％～86.9％），ORF1、ORF2和ORF3均與GD株處于較近的分支上，推測FB-NJ-13與GD親緣關系最