crylIa8基因和GsHLP2基因轉化玉米自交系的研究.pdf

1、玉米是世界上重要的糧食作物和飼料作物，但由于玉米中賴氨酸含量偏低，致使玉米中蛋白質(zhì)的實際利用率只有40％-50％。同時隨著人們生活水平的提高、膳食結構的改變，對玉米蛋白品質(zhì)的要求越來越高。另一方面，由于蟲害的發(fā)生，玉米產(chǎn)量遭到極大的損失，其中以玉米螟危害最重。通過基因工程方法將高賴氨酸蛋白基因和抗蟲基因轉入玉米中，從而改善玉米的蛋白品質(zhì)，降低蟲害對玉米產(chǎn)量的影響具有重要的意義。
　　 本研究選取7個玉米自交系進行愈傷組織誘導，以

2、誘導出的較好的胚性愈傷組織為受體，利用農(nóng)桿菌介導法對其進行遺傳轉化，將分別帶有高賴氨酸蛋白基因GsHLP2、抗蟲基因cry1Ia8和bar選擇標記基因的雙T-DNA表達載體轉化玉米愈傷組織，篩選共轉化植株。為通過轉基因植株后代的遺傳分離培育無選擇標記的轉基因玉米提供材料。主要研究結果如下：⑴抗蟲基因cry1Ia8植物表達載體的構建。構建了由帶有內(nèi)含子的組成型強啟動子Ubi調(diào)控的cry1Ia8基因植物表達載體，用于農(nóng)桿菌介導法轉化。⑵農(nóng)桿

3、菌介導的玉米自交系遺傳轉化體系的建立。對7個玉米自交系和4種培養(yǎng)基組的合進行篩選，選擇出了最適合誘導愈傷組織的自交系、培養(yǎng)基組合。其中B73(N6)和HiⅡB(NB)組合的初始愈傷誘導率和胚性愈傷誘導率分別為82.3％、73.9％和70.5％、63.8％，相比之下B73(N6)組合的誘導率和愈傷狀態(tài)都優(yōu)于HiⅡB(NB)組合，故選擇B73的愈傷組織作為遺傳轉化受體。對B73玉米胚性愈傷組織農(nóng)桿菌介導的轉化體系進行了優(yōu)化，確立了較為較優(yōu)的