高油玉米自交系再生體系的建立與耐鹽基因的轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、目前玉米遺傳轉(zhuǎn)化僅局限于少數(shù)幾種材料，利用高油材料建立高效的再生體系具有重要的意義。本試驗(yàn)以五個(gè)優(yōu)良的高油自交系GY220、GY246、GY302、GY798、GY923的幼胚為外植體，對(duì)基因型、培養(yǎng)基、幼胚大小、環(huán)境條件、激素配比等影響高油玉米幼胚再生的因素展開了系統(tǒng)研究，結(jié)果表明(1)基因型是影響胚性愈傷誘導(dǎo)的最主要因素，其中GY246和GY302誘導(dǎo)的胚性愈傷率最高，可達(dá)到100％，而GY923只有6％：(2)所有基因型材料在MB

2、誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的胚性愈傷誘導(dǎo)率最高，并且MB誘導(dǎo)培養(yǎng)基可以改良胚性愈傷；(3)幼胚大小1.5-2mm最適于誘導(dǎo)胚性愈傷：(4) 6-BA濃度為 6mg/L 時(shí)愈傷組織分化率最高；(5) NAA 濃度為 0.2mg/L時(shí)最適合于生根。 此外，為了建立高油玉米轉(zhuǎn)化體系，并為高油玉米育種提供抗旱耐鹽的親本材料，本試驗(yàn)以GY246、GY302的幼胚為受體材料，根癌農(nóng)桿菌EHA105為供體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，該菌株攜帶的質(zhì)粒p3301上含有目的基因S

3、OS基因(SOS1、SOS2、SOS3)。對(duì)影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)幼胚的幾個(gè)因素如基因型、共培養(yǎng)時(shí)間、共培養(yǎng)培養(yǎng)基中AgNO<,3>和抗生素的濃度展開了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明GY302可以作為轉(zhuǎn)化研究的材料，其最佳共培養(yǎng)時(shí)間為3天，共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加AgNO<,3>10mg/L 時(shí)可以提高侵染后幼胚的胚性愈傷誘導(dǎo)率，在恢復(fù)培養(yǎng)基中抗生素Cef濃度為250mg/L 時(shí)可以抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)。 本試驗(yàn)用含有15 mg/L PPT的篩選培養(yǎng)基對(duì)愈傷