2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、細(xì)胞分裂是生物體生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ)。近年來(lái),細(xì)胞周期的調(diào)控機(jī)制逐漸為人們所關(guān)注。在高等植物中,細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子在雙子葉模式植物擬南芥中已經(jīng)被系統(tǒng)分析,但在單子葉模式植物水稻(Oryza sativa)中研究則較少。水稻是我國(guó)重要的糧食作物,研究水稻細(xì)胞周期的調(diào)控機(jī)制對(duì)于有目的的改善水稻的農(nóng)藝性狀(如加速生長(zhǎng)、增加株高、改善株型、提高千粒重等)進(jìn)而提高水稻產(chǎn)量有著重要的意義。水稻基因組測(cè)序的完成及大量信息學(xué)數(shù)據(jù)的出現(xiàn)為查找水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵

2、調(diào)節(jié)因子提供了方便。為了獲得水稻所有的細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,本研究根據(jù)擬南芥基因組提供的信息,在水稻公共數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行序列檢索,將檢索到的序列進(jìn)行了信息挖掘,進(jìn)而對(duì)水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因的表達(dá)模式和功能進(jìn)行了初步研究。 本研究通過(guò)序列比對(duì)獲得了90個(gè)水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子的基因序列。這些調(diào)節(jié)因子包括44個(gè)細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)、25個(gè)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)、7個(gè)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑(KRP)、9個(gè)E2F

3、轉(zhuǎn)錄因子,另外還有2個(gè)成視網(wǎng)膜瘤蛋白(Rb),2個(gè)WEE激酶和1個(gè)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶亞單位(CKS)。對(duì)這些調(diào)節(jié)因子的蛋白序列進(jìn)行了聚類分析并系統(tǒng)命名,其中有41個(gè)調(diào)控因子的名稱是新命名的或?qū)ζ湓械拿Q進(jìn)行了更正。聚類分析以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),水稻和擬南芥的細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子之間不僅在數(shù)目上是保守的,在蛋白序列和結(jié)構(gòu)特征上同樣比較保守。 為了研究水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因在水稻發(fā)育過(guò)程中的功能,首先利用半定量RT-PCR

4、的方法初步研究了上述基因在水稻不同組織中的時(shí)空表達(dá)模式。根據(jù)表達(dá)模式,水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵凋節(jié)基因大致可分為五大類。這些基因中,同一基因家族成員之間具有相似的表達(dá)模式,而不同基因家族之間表達(dá)模式差異較大。暗示不同家族的細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因在水稻發(fā)育過(guò)程中可能起著不同的作用,而同一家族的基因成員之間可能存在功能冗余。 為精確地了解水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因所表達(dá)的細(xì)胞和組織,隨機(jī)選取Orysa;CycA2;1、Orysa;CycB2;2

5、、Orysa;CycU4;4與Orysa;CDKG;1四個(gè)基因進(jìn)行了原位雜交分析。原位雜交結(jié)果顯示水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因具有時(shí)空表達(dá)特異性,特異地在細(xì)胞分裂旺盛的組織如根端分生組織、苗端分生組織以及發(fā)育的胚中表達(dá)。另外,原位雜交結(jié)果與半定量RT-PCR結(jié)果一致,證明通過(guò)半定量RT-PCR來(lái)研究基因表達(dá)模式的方法是比較可靠的。 為了研究生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素對(duì)水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵基因的調(diào)節(jié)作用,利用半定量RT-PCR的方法研究了這兩種激

6、素對(duì)上述基因表達(dá)的調(diào)控模式。結(jié)果顯示,生長(zhǎng)素調(diào)控表達(dá)的基因有29個(gè),其中有25個(gè)基因的表達(dá)水平上調(diào),4個(gè)基因的表達(dá)水平下調(diào);細(xì)胞分裂素調(diào)控表達(dá)的基因有37個(gè),其中,12個(gè)基因表達(dá)上調(diào),25個(gè)基因表達(dá)下調(diào);在這些表達(dá)變化的基因中,18個(gè)基因的表達(dá)同時(shí)受到生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的調(diào)節(jié)。這表明生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素能夠分別或著同時(shí)調(diào)節(jié)不同水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。 在種子中高水平表達(dá)的基因可能對(duì)種子的發(fā)育起著重要的作用。根據(jù)水稻90個(gè)細(xì)

7、胞周期關(guān)鍵基因的表達(dá)模式,選取在種子中高水平表達(dá)的7個(gè)基因--Orysa;CycA2;1、Orysa;CycB1;1、Orysa;CycB2;2、Orysa;CDKE、Orysa;DEL1、Orysa;DP1以及Orysa;E2F4,通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化分析其在水稻種子發(fā)育過(guò)程中的功能。觀察轉(zhuǎn)基因水稻的表型發(fā)現(xiàn)Orysa;CycB1;1相關(guān)轉(zhuǎn)基因水稻植株的生殖發(fā)育異常,因此,對(duì)Orysa;CycB1;1的功能進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。 對(duì)轉(zhuǎn)基

8、因植株進(jìn)行表型分析發(fā)現(xiàn),Pubi::CycB1;1RNAi轉(zhuǎn)基因水稻生殖發(fā)育異常,表現(xiàn)為部分花粉和子房敗育、結(jié)實(shí)率降低、種子發(fā)育異常、胚乳的發(fā)育受到抑制而胚的生長(zhǎng)得到促進(jìn)。組織學(xué)分析顯示,授粉后3天(3 DAP)的轉(zhuǎn)基因水稻種子胚乳發(fā)育出現(xiàn)異常,胚與對(duì)照相比沒(méi)有顯著差異,9 DAP的轉(zhuǎn)基因種子中胚乳幾乎消失,而胚與對(duì)照相比體積則增大三至四倍。在胚乳中特異敲除Orysa;CycB1;1發(fā)現(xiàn),PGluA-1::CycB1;1RNAi轉(zhuǎn)基因水

9、稻能夠產(chǎn)生與上述表型類似的種子,表明Orysa;CycB1;1直接調(diào)控水稻胚乳的發(fā)育,同時(shí)影響胚的發(fā)育。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,Pubi::CycB1;1RNAi轉(zhuǎn)基因水稻種子胚體積增大主要是由于細(xì)胞體積增加所致,與細(xì)胞數(shù)目無(wú)關(guān)。 半定量RT-PCR、熒光實(shí)時(shí)定量PCR、原位雜交以及PCycB1;1::GUS轉(zhuǎn)基因水稻種子的組織學(xué)染色結(jié)果顯示,Orysa;CycB1;1在分裂旺盛的組織和細(xì)胞中表達(dá),尤其在發(fā)育早期種子的胚和胚乳中均表達(dá),暗

10、示該基因?qū)λ痉N子胚和胚乳的發(fā)育起調(diào)控作用。 對(duì)PGluA-1::CycB1;1RNAi轉(zhuǎn)基因水稻胚乳的熒光實(shí)時(shí)定量PCR分析結(jié)果顯示,種子發(fā)育相關(guān)基因FIE和GW2的表達(dá)量上調(diào)。芯片分析結(jié)果表明,Pubi::CycB1;1RNAi轉(zhuǎn)基因水稻胚中,一些與發(fā)育進(jìn)程、形態(tài)建成及細(xì)胞壁組織結(jié)構(gòu)等相關(guān)的基因表達(dá)水平變化顯著。暗示這些基因的表達(dá)可能受Orysa;CycB1;1調(diào)節(jié)。 綜上所述,得出以下結(jié)論:水稻與擬南芥的細(xì)胞周期關(guān)

11、鍵調(diào)節(jié)基因在數(shù)目及結(jié)構(gòu)上相當(dāng)保守;不同家族的水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因在水稻發(fā)育過(guò)程中起著不同的作用,而同一家族成員之間可能存在功能冗余現(xiàn)象;生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素能夠分別或著同時(shí)調(diào)節(jié)不同水稻細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因的表達(dá);Orysa;CycB1;1的正常表達(dá)為水稻生殖發(fā)育所必需,該基因直接調(diào)控水稻胚乳的發(fā)育,并影響胚的發(fā)育;Orysa;CycB1;1可能通過(guò)調(diào)節(jié)FIE和GW2基因調(diào)控胚乳的發(fā)育;Orysa;CycB1;1可能通過(guò)調(diào)節(jié)與發(fā)育進(jìn)程、

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