番茄灰霉病菌的分離與毒素的提取、純化及生物測定.pdf

1、由灰葡萄孢菌侵染引起的番茄灰霉病是當(dāng)前番茄生產(chǎn)上重要的世界性病害，尤以設(shè)施栽培條件下發(fā)生較重。番茄灰霉菌的寄主很廣，已報(bào)道的寄主至少有235種，它能危害多種糧食作物、經(jīng)濟(jì)作物、蔬菜和觀賞植物。 從番茄、草莓、萵苣上采集了30個(gè)灰霉菌菌株，對(duì)其進(jìn)行了形態(tài)鑒定、ITS序列比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建。結(jié)果表明，ITS區(qū)長度基本一致，約為500bp。通過序列比對(duì)，所獲得的菌株序列與基因序列庫中已知灰霉菌序列高度同源。 文中對(duì)采集的3

2、0個(gè)灰霉菌菌株進(jìn)行了灰霉菌株致病力的測定。結(jié)果表明，成株期病情指數(shù)從12.9到89.6，苗期從4.4到80.6，各菌株在致病力上存在顯著差異。BC-5、BC-9、BC-16和BC-21四個(gè)菌株表現(xiàn)出較高的病情指數(shù)，分別為69.8，52.4，50.0和63.1。 毒素是植物病原物的次生代謝產(chǎn)物，在病原物致病過程中有重要作用。研究毒素能夠進(jìn)一步明確病原物致病因子，為解析病原物的致病機(jī)理提供依據(jù)?；移咸焰?Botrytis ciner

3、ea)在液體培養(yǎng)時(shí)可以產(chǎn)生毒素。病菌培養(yǎng)濾液經(jīng)乙酸乙酯萃取后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，可得到毒素粗提液。本研究選用4個(gè)致病力較強(qiáng)的灰霉菌株BC-5、BC-9、BC-16和BC-21，對(duì)其毒素粗提液進(jìn)行提取和生物測定結(jié)果表明，毒素能使番茄幼苗產(chǎn)生萎蔫癥狀，隨著毒素濃度的增大和處理時(shí)間的增長，番茄幼苗萎蔫越明顯：菌株培養(yǎng)時(shí)間越長產(chǎn)生的毒素活性越強(qiáng)。因此灰葡萄孢毒素對(duì)番茄植株具有明顯的毒害作用。 本試驗(yàn)從培養(yǎng)液種類、培養(yǎng)時(shí)間等角度研究了影響病菌產(chǎn)生粗

4、毒素的因子。明確了病菌較好產(chǎn)粗毒素的培養(yǎng)條件是：培養(yǎng)液為查彼培養(yǎng)液，培養(yǎng)溫度為25℃，培養(yǎng)時(shí)間為14～21d，培養(yǎng)過程中不需要光照，需要振蕩。 毒素粗提液經(jīng)薄層層析分離，發(fā)現(xiàn)毒素能產(chǎn)生2-6條層析帶，Rf值從0.149到0.663。4個(gè)菌株中分別有一條Rf值相近的條帶，表明可能是毒素的有效成分。 本研究利用分子標(biāo)記SSR對(duì)除BC-25以外的29個(gè)灰霉菌株進(jìn)行了遺傳多樣性分析。7個(gè)SSR引物得到29條帶，多態(tài)性條帶比率為8