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文檔簡介
1、本實(shí)驗(yàn)用改良的Richard培養(yǎng)液培養(yǎng)小麥紋枯病菌(Rhizotonia cerealis),并采用不同方法提取病菌毒素。結(jié)果表明,最佳提取方法為:將小麥紋枯病菌培養(yǎng)濾液于60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的1/5,加等體積甲醇、離心去沉淀,60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去甲醇。將水相用乙酸乙酯和氯仿分別先后對(duì)培養(yǎng)濾液進(jìn)行萃取,溶劑用量均為濾液體積的1.5倍,合并有機(jī)相,50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機(jī)溶劑,得到小麥紋枯病菌的粗毒素。
粗毒素經(jīng)硅膠柱層析,
2、用不同洗脫劑洗脫,每種洗脫劑共收集40瓶洗脫液,將含活性成分最多的瓶號(hào)收集液合并定為精毒素。對(duì)收集液進(jìn)行毒素活性檢測,表明去離子水洗脫毒素的作用較好,其毒素對(duì)小麥幼根生長的抑制率達(dá)40.9%。不同方法提取的粗毒素具有相似的紫外吸收曲線,吸收峰在190-230nm左右。薄層色譜分析表明該毒素為有機(jī)酸類物質(zhì)。
以粗毒素接種小麥葉鞘后,接種部位出現(xiàn)類似病害癥狀的壞死斑;粗毒素對(duì)小麥胚根的伸長有明顯抑制作用,抑制率可達(dá)93.5%;
3、影響小麥水分吸收與運(yùn)輸,使植株失水甚至萎蔫;對(duì)小麥葉鞘和葉片細(xì)胞膜有明顯的損傷作用,導(dǎo)致細(xì)胞膜透性改變,損傷率分別達(dá)54.4%與47.8%;對(duì)小麥葉綠體有明顯的破壞作用,毒素處理植株的葉鞘明顯黃化,葉片葉綠素含量與對(duì)照相比,苗期和拔節(jié)期植株分別減少77.53%與49.35%。
毒素處理小麥植株后,對(duì)小麥葉鞘和葉片內(nèi)過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和超氧化歧化酶(SOD)等防御酶活性都有影
4、響。具體表現(xiàn)在高濃度時(shí)(5倍稀釋液),毒素能抑制防御酶活性,而低濃度時(shí)對(duì)各種防御酶活性均有促進(jìn)增強(qiáng)作用。20倍毒素稀釋液處理,POD、PPO、PAL和SOD活性比對(duì)照分別增加了34.4%、31.9%、56.4%和34.9%。各種防御酶活性高峰一般出現(xiàn)在毒素處理后的第48h,72h時(shí)有不同程度的降低。
小麥紋枯病菌粗毒素具有明顯誘導(dǎo)寄主可溶性蛋白積累的作用。毒素處理24h時(shí),植株可溶性蛋白含量已顯著高于對(duì)照,且在48h時(shí)濃度
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