水稻U-Box蛋白質(zhì)在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)分析.pdf

1、背景：真核生物基因組中廣泛存在U-BoX基因，其編碼蛋白質(zhì)大部分是泛素系統(tǒng)中決定底物特異性識(shí)別的E3蛋白質(zhì)，其構(gòu)象與RING-finger 極其相似。U-BoX蛋白質(zhì)能促進(jìn)底物蛋白質(zhì)泛素化降解，對(duì)細(xì)胞內(nèi)異常蛋白質(zhì)的降解及質(zhì)量控制方面發(fā)揮著重要的作用。水稻基因組中有77個(gè)U-BoX蛋白質(zhì)，系統(tǒng)了解他們的表達(dá)可為功能研究提供數(shù)據(jù)。
　　 研究目的：制備針對(duì)水稻U-BoX蛋白質(zhì)的抗體，了解水稻中U-BoX蛋白質(zhì)在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)信息

2、，為功能研究積累數(shù)據(jù)。
　　 材料與方法：選取5個(gè)水稻U-BoX蛋白質(zhì)，其共同結(jié)構(gòu)特點(diǎn)為U-BoX結(jié)構(gòu)在N端，C 端有ARM 結(jié)構(gòu)重復(fù)。用計(jì)算機(jī)軟件預(yù)測(cè)抗原決定簇，細(xì)菌體系體外表達(dá)、純化U-BoX蛋白質(zhì)的片段，免疫動(dòng)物制備多克隆抗體，用Western blotting 檢測(cè)U-Box蛋白質(zhì)在水稻品種93-11 苗期地上部和地下部、分蘗期根和莖、孕穗期劍葉和幼穗、開(kāi)花期劍葉和穗子、成熟期劍葉和種子中的表達(dá)，并與EST數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的

3、U-Box基因EST數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較分析。
　　 結(jié)果：體外克隆表達(dá)后，獲得了純化的蛋白質(zhì)，制備的抗體特異性強(qiáng)，Westernblotting 檢測(cè)可見(jiàn)一條明顯的主帶，其中Os06g01304和Os12g38210兩個(gè)蛋白質(zhì)的表觀分子量與預(yù)測(cè)分子量相符，Os01g66130、Os02g49950和Os08g01900 三個(gè)蛋白質(zhì)的表觀分子量低于預(yù)測(cè)分子量。5個(gè)U-BoX蛋白質(zhì)在水稻生長(zhǎng)發(fā)育的不同時(shí)期或部位基本上是組成型表達(dá)，且表達(dá)

4、量接近。對(duì)NCBI上公布的來(lái)自274個(gè)文庫(kù)的100 萬(wàn)條以上的EST 進(jìn)行分析，可以看出5個(gè)U-BoX蛋白質(zhì)EST的數(shù)量分布大致均勻，與Westernblotting 結(jié)果揭示的組成型表達(dá)平行，與ATPase、HSP81-3、EGF-1 alpha和RuBisCo等對(duì)照基因相比，U-BoX基因的EST數(shù)目相對(duì)很少，說(shuō)明它們屬于低豐度轉(zhuǎn)錄的基因。
　　 結(jié)論：選取5個(gè)水稻U-BoX蛋白質(zhì)，通過(guò)抗原決定簇預(yù)測(cè)，表達(dá)片段蛋白質(zhì)，制備了