急性熱應(yīng)激對(duì)雄性小鼠生殖系統(tǒng)的影響及電解質(zhì)的抗熱應(yīng)激效果.pdf

1、熱應(yīng)激反應(yīng)是指從原核生物到人類在高溫環(huán)境下發(fā)生的應(yīng)激反應(yīng)。此反應(yīng)的特點(diǎn)是選擇性合成一組多肽--熱休克蛋白(heat shock proteins, HSPs).根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量及等電點(diǎn)不同將HSPs分為七大家族：即大分子HSP家族，HSP90家族，HSP70家族，HSP60家族，HSP40家族，小分子HSP家族和泛素.其中HSP70是HSPs中最為保守，也是最為重要的成員。熱應(yīng)激的一個(gè)直接后果是破壞了機(jī)體的酸堿平衡，電解質(zhì)具有維持酸堿平

2、衡的功能，因此是目前常用的抗熱應(yīng)激藥物。本試驗(yàn)采用高溫應(yīng)激模型，觀察急性熱應(yīng)激對(duì)雄性小鼠生殖系統(tǒng)的損傷，睪丸、附睪、輸精管中HSP70表達(dá)的變化情況，以及電解質(zhì)對(duì)小鼠抗熱應(yīng)激能力的影響，為研究熱應(yīng)激對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的損傷和電解質(zhì)作為抗熱應(yīng)激藥物的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。
　　 試驗(yàn)Ⅰ中32只8周齡雄性小鼠隨機(jī)分為4組（對(duì)照組、0.5h組、th組、3h組），每組8只，分籠飼養(yǎng)于自動(dòng)控制條件下。光照周期為14h光照，10h黑暗，室溫15～2

3、5℃，飼養(yǎng)1周后開(kāi)始試驗(yàn)。利用恒溫培養(yǎng)箱對(duì)小鼠實(shí)施持續(xù)全身熱應(yīng)激，溫度控制在（39±0.5）℃范圍內(nèi)，時(shí)間分別為0.5h，th,3h.應(yīng)激后立即眼球采血，處死所有小鼠，分離血清測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶（glutamic oxaloacetic transaminase, GOT）含量。取睪丸、單側(cè)附睪、輸精管，置于4％多聚甲醛溶液固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片(6um)，用于組織學(xué)研究.另一側(cè)附睪用于制備精子懸液，計(jì)算精子密度和頂

4、體畸形率。
　　 試驗(yàn)Ⅱ中24只8周齡雄性小鼠隨機(jī)分為3組（對(duì)照組、熱應(yīng)激組，抗熱應(yīng)激組），每組8只，分籠飼養(yǎng)于自動(dòng)控制條件下.光照周期同樣為14h光照，10h黑暗，室溫保持在15～25℃，抗熱應(yīng)激組的飲水中添加0.2％的KCL+NH4CL+NaHCO3，其它組引用自來(lái)水，飼養(yǎng)21日后開(kāi)始試驗(yàn).利用恒溫培養(yǎng)箱對(duì)小鼠實(shí)施持續(xù)全身熱應(yīng)激，溫度控制在（39±0.5）℃范圍內(nèi)，時(shí)間為3h。應(yīng)激后立即眼球采血，處死所有小鼠，分離血清測(cè)定G

5、OT含量。睪丸、單側(cè)附睪、輸精管用于組織學(xué)研究，另一側(cè)附睪用于制備精子懸液，計(jì)算精子密度和頂體畸形率.
　　 試驗(yàn)Ⅰ結(jié)果顯示：
　　 a)應(yīng)激前后小鼠體重變化
　　 與應(yīng)激前相比，應(yīng)激后小鼠體重有下降趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）.
　　 b)應(yīng)激小鼠血液GOT的變化
　　 隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，小鼠血液GOT含量不斷升高，試驗(yàn)組極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　 c)應(yīng)激小鼠睪丸

6、系數(shù)、精子密度、頂體畸形率的變化
　　 受熱應(yīng)激影響，小鼠睪丸系數(shù)下降，頂體畸形率升高，但差異均不顯著（P＞0.05），3h組精子密度顯著降低（P＜0.05），其它兩組降幅不明顯（P＞0.05）。
　　 d)應(yīng)激小鼠睪丸、附睪、輸精管中HSP70的表達(dá)情況
　　 免疫組化觀察發(fā)現(xiàn)：正常狀態(tài)下，HSP70在睪丸生精小管中沒(méi)有表達(dá)，應(yīng)激后分布于間質(zhì)細(xì)胞核，此外在精母細(xì)胞與精子細(xì)胞核中也有分布；附睪中HSP70主要分布

7、于主細(xì)胞質(zhì)，基細(xì)胞和亮細(xì)胞中沒(méi)有表達(dá)，應(yīng)激后纖毛細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)大量棕色顆粒；輸精管中HSP70主要定位在基細(xì)胞質(zhì)，主細(xì)胞中不表達(dá).隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，HSP70在睪丸、附睪中的表達(dá)量明顯升高，而輸精管中沒(méi)有太大變化.
　　 試驗(yàn)Ⅱ結(jié)果顯示：
　　 a)應(yīng)激前后小鼠體重變化
　　 應(yīng)激后小鼠體重呈下降趨勢(shì)，但與應(yīng)激前相比沒(méi)有顯著變化（P0.05），抗熱應(yīng)激組體重降幅略小于熱應(yīng)激組。
　　 b)應(yīng)激小鼠血液GO

8、T的變化
　　 與對(duì)照組相比，熱應(yīng)激組血液GOT含量急劇升高，二者差異極顯著(P＜0.01);抗熱應(yīng)激組血液GOT含量與熱應(yīng)激組相比極顯著下降（P＜0.01）。
　　 c)應(yīng)激小鼠睪丸系數(shù)、精子密度、頂體畸形率的變化
　　 與對(duì)照組相比，熱應(yīng)激組小鼠精子密度顯著降低（P＜0.05），睪丸系數(shù)下降，頂體畸形率升高，但差異均不顯著（P＞0.05）；與熱應(yīng)激組相比，抗熱應(yīng)激組睪丸系數(shù)、精子密度上升，頂體畸形率下降，但差

9、異均不顯著(P＞0.05).
　　 d)應(yīng)激小鼠睪丸、附睪、輸精管中HSP70的表達(dá)情況
　　 免疫組化觀察發(fā)現(xiàn)：睪丸組織中HSP70在睪丸生精小管中沒(méi)有表達(dá)，抗熱應(yīng)激組HSP70的分布范圍由熱應(yīng)激組時(shí)的間質(zhì)細(xì)胞、精母細(xì)胞、精子細(xì)胞縮小到只定位于間質(zhì)細(xì)胞；附睪中HSP70主要分布于主細(xì)胞質(zhì)，熱應(yīng)激組的表達(dá)量明顯強(qiáng)于對(duì)照組，并且纖毛細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)大量棕色顆粒，抗熱應(yīng)激組HSP70的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于熱應(yīng)激組；輸精管中HSP70