柑橘特異分子標記與進化關系分析.pdf

1、柑橘（Citrus）是多年生木本果樹，具有復雜的遺傳背景，經過長期雜交和芽變選種，其進化關系更為復雜。為了能有效區(qū)分和鑒定柑橘種質資源，前人通過DNA分子標記等方法區(qū)分和鑒定柑橘種質資源。柑橘RAPD分析篩選出的一個特異隨機引物OPA08能區(qū)分柑橘三屬八大類的種質資源。為了揭示該引物所具有的特殊性，本研究深入分析了隨機引物OPA08與柑橘遺傳信息之間的關系。本研究采集了涵蓋柑橘三屬的22個材料用OPA08引物進行RAPD擴增，對擴增結果

2、進行了PCR-Southern雜交分析，并從電泳特征帶中回收了23條特異片段進行測序分析。通過序列比對和聚類分析，印證了各種質之間的進化關系，支持前人對于柑橘進化關系的分析，并發(fā)現這些序列與反轉錄轉座子具有較高同源性，說明反轉錄轉座子對柑橘的進化具有重要作用。主要結果如下：
　　 1．建立了穩(wěn)定的RAPD擴增體系：2μl 10×buffer：2.0 mmol/L Mg2+；0.2 mmol/LdNTPs：0.5μmol/L OP

3、A08引物；100ng模板DNA和0.5 U Taq酶。通過此體系擴增得到清晰的電泳特征帶。
　　 2．對RAPD擴增電泳產物的PCR-Southern雜交結果顯示，以紐荷爾OPA08-280bp特征帶標記的探針僅與酸橙、椏柑、葡萄柚的相同位置帶有強雜交信號。而宜昌橙OPA08-280bp特征帶標記的探針則與寬皮柑橘OPA08-200bp、柚子OPA08-280bp、檸檬OPA08-400bp和OPA08-500bp特征帶有較強

4、的雜交信號，而且在大片段處雜交帶較多。這些結果表明，紐荷爾OPA08-280bp特征帶代表的是較新產生的橙類特異遺傳信息，而宜昌橙OPA08-280bp特征帶則攜帶有屬于柑橘類植物共有的一些遺傳信息，說明宜昌橙應該是較為原始的基本種之一。
　　 3．聚類分析和序列比對結果表明，柚子、枳殼、檸檬的OPA08-310bp特征帶及寬皮柑橘類OPA08-200bp特征帶有較高的同源性，含有一部分相同的遺傳信息。甜橙、酸橙、椏柑的OPA0

5、8-280bp特征帶相似度較高，且與金柑OPA08-500bp特征帶有部分同源。宜昌橙OPA08-280bp特征帶與檸檬、粗檸檬OPA08-500bp特征帶的相似度較高。
　　 4．測序序列的生物信息學分析結果顯示，OPA08引物在不同柑橘植物中擴增得到的片段均與反轉錄轉座子有較高同源性，說明反轉錄轉座子對柑橘變異和進化具有重要作用。反轉錄轉座子的傳遞可以為人們研究和分析柑橘類植物的遺傳進化關。
　　 6系提供有效的證據