抗除草劑草甘膦轉(zhuǎn)基因水稻的鑒定和水稻啟動子的分析.pdf

1、草甘膦是一種優(yōu)良的廣譜滅生性、內(nèi)吸傳導型除草劑。本實驗利用人工改造合成的抗草甘膦基因CP4 EPSPs基因轉(zhuǎn)化水稻，獲得了穩(wěn)定遺傳和表達的抗草甘膦水稻單拷貝轉(zhuǎn)基因家系。田間實驗證明，在苗期噴施生產(chǎn)濃度農(nóng)達后，抗除草劑草甘膦轉(zhuǎn)基因水稻可正常完成全生育期，且主要農(nóng)藝性狀不發(fā)生明顯改變。
　　 雙向啟動子是基因組中DNA雙鏈上轉(zhuǎn)錄方向相反的一對相鄰基因所共用的轉(zhuǎn)錄起始元件組。在轉(zhuǎn)基因?qū)嵺`中，常常需要進行多基因轉(zhuǎn)化，使用雙向啟動子，有助

2、于簡化載體構(gòu)建，減少由于反復使用相同啟動子所造成的轉(zhuǎn)基因沉默。本文通過對粳稻中被TIGR第5版注釋為表達的成對基因進行生物信息學分析，參照前人在人類基因組中進行的類似研究，根據(jù)反向基因?qū)﹂g距大小的雙峰分布情況，認為間距較小的峰是雙向啟動子富集區(qū)間，依此鑒定出461個候選的雙向啟動子。根據(jù)本實驗室的Affymetrix GeneChip（） Rice Genome Array表達譜數(shù)據(jù)計算基因?qū)Φ谋磉_量相關(guān)系數(shù)，發(fā)現(xiàn)候選雙向啟動子的表達量

3、與其他基因?qū)Ρ?，更具相關(guān)性。同時，初步統(tǒng)計了各基因?qū)幼訁^(qū)幾個順式元件的出現(xiàn)頻率，發(fā)現(xiàn)超過一半的候選雙向啟動子，其TATABox只出現(xiàn)在一條鏈上，這與其他啟動子相比顯著偏低。
　　 植物的生長發(fā)育是不同的基因在時間和空間上有序表達和協(xié)同作用的過程。基因的表達調(diào)控是一個多層次的復雜過程，轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控是多級調(diào)控中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。啟動子作為轉(zhuǎn)錄水平上一個重要的調(diào)控元件，其研究又成為分子生物學研究的熱點之一。隨著基因工程的發(fā)展，組成

4、型啟動子在應用的過程中逐漸暴露了一些問題，因此人們尋找更為有效的組織器官特異型與環(huán)境誘導型啟動子來代替組成型啟動子，以更好地調(diào)控植物基因表達。
　　 在研究順式元件的方法中，長期以來是將每個堿基作為獨立單元處理，沒有考慮堿基間的依賴關(guān)系；將一定長度的相鄰堿基合并處理，是在未知實際互作堿基的前提下，為考慮順式元件堿基間依賴關(guān)系而作的一種變換。這也與實際互作中多個堿基共同與反式因子的motif作用相一致。同時，合并后代表的信息量有所