草甘膦誘導(dǎo)高表達(dá)基因及啟動(dòng)子的克隆和功能分析.pdf

1、目前報(bào)道的抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物中，驅(qū)動(dòng)抗性基因表達(dá)的都是強(qiáng)表達(dá)的組成型啟動(dòng)子，使這些抗草甘膦基因幾乎在轉(zhuǎn)基因植物的所有部位和所有發(fā)育階段都高效表達(dá)，這無疑增加了植株的代謝負(fù)擔(dān)，造成物質(zhì)和能源上的巨大浪費(fèi)。為了使外源抗草甘膦基因在轉(zhuǎn)基因植物體內(nèi)發(fā)揮作用的同時(shí)盡可能減少對(duì)受體植物的不利影響，本研究的主要目的是分離草甘瞵脅迫誘導(dǎo)高表達(dá)基因及啟動(dòng)子，以期為進(jìn)一步利用該啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)外源抗草甘膦基因或其它功能基因只在草甘膦噴施后高效表達(dá)奠定基礎(chǔ)?！　?/p>

2、本研究通過DDRT-PCR技術(shù)，篩選40對(duì)引物組合，從棉花和大豆中共獲得65個(gè)誘導(dǎo)前后表達(dá)量有明顯差異的EST序列。其中從大豆中獲得正調(diào)控片段31個(gè)，負(fù)調(diào)控片段8個(gè)；從棉花中獲得正調(diào)控片段25個(gè)，負(fù)調(diào)控片段1個(gè)。BLAST結(jié)果表明：草甘膦誘導(dǎo)的EST序列與水楊酸誘導(dǎo)、茉莉酸激發(fā)、NaCl處理、冷脅迫、熱激、病原體處理等其它非生物脅迫誘導(dǎo)的序列有高達(dá)82％以上的同源性。進(jìn)一步通過RT-PCR篩選出草甘膦誘導(dǎo)后在棉花中表達(dá)量最顯著增加的序列