鴨病毒性肝炎病毒的分離鑒定及ELISA檢測(cè)抗體方法的建立.pdf

1、鴨病毒性肝炎（Duckvirushepatitis，DVH）是6周齡以下雛鴨的一種傳播迅速、高度致死、肝腫大出血為主要特征的病毒性疾病，病原為鴨肝炎病毒（Duckhepatitisvirus，DHV）。該病在國(guó)內(nèi)雛鴨群中頻頻發(fā)生，給養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)造成了極大的損失。本實(shí)驗(yàn)從一群發(fā)病鴨的病料中分離到一株鴨肝炎病毒，并建立了檢測(cè)鴨肝炎病毒抗體的ELISA快速檢測(cè)方法，取得了如下結(jié)果： 1.鴨病毒性肝炎病毒株的分離鑒定對(duì)河南省內(nèi)疑似鴨病毒性

2、肝炎感染鴨病料的收集，通過(guò)細(xì)菌分離、病毒分離、中和試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)、雛鴨保護(hù)試驗(yàn)以及病毒對(duì)紅細(xì)胞的凝集試驗(yàn)，分離到一株鴨病毒性肝炎Ⅰ型病毒株，并對(duì)病毒進(jìn)行了初步鑒定，該病毒的雞胚半數(shù)致死量（ELD50）為0.2ml10-7.659稀釋的病毒液，中和試驗(yàn)結(jié)果表明將血清作1：75倍稀釋可保護(hù)50％的雞胚免于死亡。 2.鴨抗DHV血清的制備及鴨傳染性肝炎血清抗體ELISA快速檢測(cè)方法的建立通過(guò)對(duì)鴨病毒性肝炎病毒種毒的處理和鴨的多次免

3、疫，制備了鴨抗DHV血清。 將通過(guò)鴨胚傳代的病毒經(jīng)過(guò)純化后，作為包被抗原，建立了一種檢測(cè)血清中DHV抗體的間接ELISA方法。通過(guò)對(duì)方法學(xué)的研究，確定了ELISA反應(yīng)的各組分的最適工作條件，確定抗原最佳包被濃度為7.5μg，血清最佳稀釋度約為1：320，陽(yáng)性血清OD450值（P）接近1.0，陰性血清值（N）為0.125，P/N值最大。陰性和陽(yáng)性分界明顯；通過(guò)對(duì)40份陰性鴨血清的檢測(cè)結(jié)果，確定陰陽(yáng)性臨界點(diǎn)為0.2。根據(jù)建立的ELI