流蘇石斛、鐵皮石斛微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及特征分析.pdf

1、流蘇石斛（Dendrobium fimbriatum Hook.）、鐵皮石斛（Dendrobium officinaleKimura et Migo）為蘭科（Orchidaceae)石斛屬（Dendrobium Sw.)多年附生草本植物，是常用的貴重中藥材，以其新鮮或干燥的莖入藥，集藥用和觀賞價(jià)值于一身，鐵皮石斛（D. Officinale）更是藥用石斛之極品。目前，流蘇石斛、鐵皮石斛的自然資源已處于瀕危狀態(tài)。為了研究野生流蘇石斛、鐵皮

2、石斛遺傳多樣性、對(duì)其種質(zhì)資源的保存提出保護(hù)策略，本文通過對(duì)其微衛(wèi)星的開發(fā)與分析，來研究他們居群間的遺傳多樣性。
　　 本文通過磁珠富集法構(gòu)建流蘇石斛、鐵皮石斛的微衛(wèi)星文庫開發(fā)SSR分子標(biāo)記。首先，用生物素標(biāo)記的混合探針(AG)15、(TG)15、(GAA)8、(GATA)7與經(jīng)過使用Sau3AI DNA內(nèi)切酶酶切流蘇石斛、鐵皮石斛的基因組總DNA進(jìn)行選擇性雜交，使用鏈霉親和素包裹的磁珠富集含有微衛(wèi)星標(biāo)記的DNA片斷，通過克隆、測(cè)

3、序構(gòu)建流蘇石斛、鐵皮石斛的微衛(wèi)星文庫。共得到流蘇石斛微衛(wèi)星序列19條，25條鐵皮石斛微衛(wèi)星序列，其中，鐵皮石斛有2條四堿基、1條3堿基重復(fù)的微衛(wèi)星序列。針對(duì)流蘇石斛微衛(wèi)星序列設(shè)計(jì)了15對(duì)引物，通過PCR反應(yīng)優(yōu)化篩選出10對(duì)擴(kuò)增結(jié)果顯出多態(tài)性的引物，這10條流蘇石斛微衛(wèi)星序列可作為標(biāo)記，可應(yīng)用于流蘇石斛遺傳多樣性分析。針對(duì)鐵皮石斛設(shè)計(jì)了20對(duì)引物，其中的13條序列作為鐵皮石斛的微衛(wèi)星標(biāo)記，可進(jìn)一步應(yīng)用于其居群間遺傳多樣性的研究。