名貴楓斗類石斛的分子鑒別及微衛(wèi)星標記的開發(fā)研究.pdf

1、石斛為傳統(tǒng)名貴中藥材，歷史悠久，早在《神農本草經》中就被列為上品，有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳等功效。根據形態(tài)特征和加工規(guī)格的不同，分為楓斗類石斛和黃草類石斛兩大類，而鐵皮石斛、兜唇石斛、齒瓣石斛皆屬名貴楓斗類石斛。本文作者擬運用一種基于適配器連接介導的等位基因特異性擴增法對鐵皮石斛、兜唇石斛、齒瓣石斛等名貴的楓斗類石斛進行鑒別研究。通過三條特異性引物和一條通用引物，兜唇石斛、齒瓣石斛、鐵皮石斛分別擴增出大小為198 bp、250 b

2、p、310 bp的片段。三條片段可以在2.0％的瓊脂糖凝膠電泳清晰分開。此外運用這四條引物，在其它14種楓斗類石斛中沒有擴增出任何片段。研究結果表明，通過同時檢測rDNA ITS的三個特異性位點，ALM-ASA 可以鑒別此三種名貴楓斗類石斛。
　　 本研究對常見楓斗類石斛的葉綠體基因組psbA-trnH 區(qū)進行了測定，利用MEGA 3.0 對該區(qū)序列進行了比較分析。結果顯示：15種楓斗類石斛psbA-trnH序列長度為721-7

3、67 bp，變異位點42個，簡約信息位點11個。以Kimura-2 參數(shù)計算遺傳距離，15種楓斗類石斛種間遺傳距離在0.0013-0.0183，平均遺傳距離為0.0148。不同石斛種間均存在序列差異，全序列中共出現(xiàn)6處indels，導致種間片段長度差異較大。楓斗類石斛居群間psbA-trnH 區(qū)序列暫沒發(fā)現(xiàn)差異。
　　 本研究還運用磁珠富集法對報春石斛的微衛(wèi)星進行了開發(fā)。開發(fā)步驟如下：
　　 用Sau3AI 酶切報春石斛