28240.鐵皮石斛微衛(wèi)星標記的開發(fā)、通用性檢測及種質(zhì)純度鑒定

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：l、堅持以“求實、創(chuàng)新力的科學精神從事研究工作。2、本論文是我個人在導師指導下進行的研究工作和取得的研究成果。3、本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關材料均是真實的。4、本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機構已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。5、其他同志對本研究所做的貢獻均已在論文中作了聲明并表示了謝意。研究生簽名：塒啁多薛El期：蘭竺』!：簍蘭2學位論文使用授權聲明本人完全了解南京師范大學有關

2、保留、使用學位論文的規(guī)定，學校有權保留學位論文并向國家主管部門或其指定機構送交論文的電子版和紙質(zhì)版；有權將學位論文用于非贏利目的的少量復制并允許論文進入學校圖書館被查閱；有權將學位論文的內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索；有權將學位論文的標題和摘要匯編出版。保密的學位論文在解密后適用本規(guī)定。‘研究生簽名：均奇吲膨日期：一～———————————————————————————————————一一一～一一一～摘要摘要IIUfrlltIIIfff!

3、fIlfrI／fllt：I㈣㈣Y172645。鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimulaetMigo)h我國特有的石斛屬藥用植物，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，具有滋陰生津、潤肺明目、抗癌防老等功效。近年來，由于鐵皮石斛保健品和藥品的大規(guī)模開發(fā)，不但使其野生資源遭受毀滅性的破壞，而且還導致了鐵皮石斛混淆品的泛濫，因此亟須建立有效的鐵皮石斛種質(zhì)鑒別的可靠手段。在植物基因組中，由于微衛(wèi)星寡核苷酸的重復次數(shù)在同一物種的不同

4、基因型間具有差異且相對穩(wěn)定，因而SSR標記呈現(xiàn)高度多態(tài)性，可用于植物種質(zhì)的鑒別。關于鐵皮石斛SSR標記的開發(fā)和應用，本文主要進行了如下三個方面的研究：(一)運用磁珠富集法開發(fā)鐵皮石斛的微衛(wèi)星鐵皮石斛微衛(wèi)星的開發(fā)步驟如下：(1)用Sau3AI酶切鐵皮石斛基因組DNA，加接頭進行連接；(2)根據(jù)接頭的序列設計引物進行PCR，用生物素標記的(AGA)8和(AC)15兩種探針于不同雜交溫度分別與之雜交；(3)利用鏈霉親和素包裹的磁珠富集含有微衛(wèi)

5、星DNA的片段，再進行PCR擴增；(4)微衛(wèi)星序列的克隆測序。本研究共成功開發(fā)出197條微衛(wèi)星序列，并設計了60對微衛(wèi)星引物。利用這60對引物初步擴增隨機選取的48個鐵皮石斛貴州居群樣本，經(jīng)過擴增產(chǎn)物穩(wěn)定、條帶清晰、多態(tài)性高等方面的篩選，共選取了15對SSR引物用于本實驗的研究。(二)探討鐵皮石斛的SSR標記在石斛屬其它植物上的通用性運用所選的15對鐵皮石斛的SSR引物，對20種石斛屬植物進行跨種擴增檢測，除XML004，XML007在

6、石斛種間無相應大小范圍的SSR擴增產(chǎn)物外，其它SSR引物在20個石斛屬種材料上能全部或部分擴增出清晰地SSR條帶，并在種問存在一定的多態(tài)性，其中有9對(60％)引物在所有供試材料上都能擴增出條帶，通用率達到了867％。(三)運用SSR標記進行鐵皮石斛種質(zhì)純度鑒定和真實性判別隨機抽取福建某居群種質(zhì)(FJ02)的500株組培苗，對其4個SSR位點(XML003、XML005、XML006、XML008)的帶型進行統(tǒng)計。檢測出3個特殊單株在4