豬硒蛋白V(SelV)基因克隆及日糧硒水平對(duì)其組織mRNA表達(dá)豐度的影響.pdf

1、硒在體內(nèi)主要以硒蛋白的形式發(fā)揮生理功能。迄今為止，哺乳動(dòng)物中已確定的硒蛋白基因有25種，但是大部分硒蛋白在體內(nèi)的生理功能還不能確定。SelV基因是近年來(lái)報(bào)道的一個(gè)新的硒蛋白基因，在豬上，SelV基因的序列及不同硒水平日糧對(duì)其表達(dá)調(diào)控至今未有報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)以豬為模型在克隆豬SelV基因基礎(chǔ)上，研究了缺硒、正常和高硒日糧機(jī)體組織SelVmRNA豐度的變化規(guī)律。
　　 試驗(yàn)選用了28日齡，平均體重7公斤左右的斷奶公豬24頭，采用單因

2、素設(shè)計(jì)，設(shè)酵母硒添加0，0.3，3.0mgSe/kg三個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬。以缺硒的玉米、豆粕配制基礎(chǔ)日糧，含硒0.03mgSe/kg。試驗(yàn)期為16w，在試驗(yàn)0w，8w，16w清晨，前腔靜脈采集試豬血樣；16w后屠宰試豬并于肝、腎、肌肉、視丘下部、睪丸、心、脾、垂體和甲狀腺取樣。通過(guò)RACE技術(shù)克隆了包括起始密碼子、UGA密碼子及3’非翻譯區(qū)域末端的豬SelV全長(zhǎng)基因，并對(duì)不同日糧硒水平下試豬上述組織的SelV基因

3、作實(shí)時(shí)定量PCR分析。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，克隆的豬SelV基因cDNA長(zhǎng)度1233bp，編碼區(qū)長(zhǎng)1029bp，編碼342個(gè)氨基酸，其編碼的cDNA序列與人的序列相似度達(dá)97％;并且與鼠、兔、人等氨基酸序列比對(duì)有較高的相似性。日糧添加0.3和3.0mgSe/kg硒組試豬血漿和肝臟GPX活性顯著高于低硒組（P＜0.05），但0.3與3.0mg之間GPX活性無(wú)顯著差異(P＞0.05)，基礎(chǔ)日糧組試豬處于于缺硒狀態(tài)。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR

4、分析顯示，各硒水平都以睪丸組織SelVmRNA豐度最高，較其他組織高出30-1000倍(P＜0.01)，肝臟、甲狀腺、垂體、下丘腦及腎臟SelVmRNA表達(dá)豐度也較高，心臟、血液白細(xì)胞及脾臟中SelVmRNA表達(dá)豐度較低，肌肉組織中改基因表達(dá)豐度最低；隨著日糧硒水平的增加，腎臟SelVmRNA豐度一直呈下降趨勢(shì)(P＜0.05）。低硒日糧中(0mgSe/kg)，、視丘下部和肌肉組織SelVmRNA的表達(dá)豐度高于添加硒組(0.3mgSe/k