水稻基因打靶與懸浮細胞團轉(zhuǎn)基因體系研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、南昌大學碩士學位論文水稻基因打靶與懸浮細胞團轉(zhuǎn)基因體系研究姓名：黎晶晶申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：朱友林20081219ABSTRACTABSTRACTAstheexpressionproductofricegeneBel，CYP81A6(thecytochromeP450)isresponsibleforresistancetoherbicidebentazon，SOthebentazonsusceptivericecou

2、ldbeobtainedwiththeknockingouttechniquesWhilethetargetingeffectofdifferentvectorswithvariouslengthofhomologyfragmentaredistinctThevectorpRB2withabout2kbleftand2kbrighthomologousfragmentandthevectorpJL9with4kbleftand4kbri

3、ghthomologousfragmentareconstructedinthisresearch，whilethepRB2vectorcanbeusedintargetgeneBelofShijinBOtherwise，Agrobacterim—mediatedgenetictransformationsystemofShijinBsuspensioncellswassuccessfullyconstructedinthisresea

4、rchThemainlyresultasfollows：1BeltargetingvectorpRB2withBelhomologylengthof2224bpontheleftand2394bpontheright，andthehptandDTAasitspositiveandnegativeselectionmarkerwascontructed，andBeltargetingvectorwiththeabout4kbleftand

5、about4kbfightBelhomologousfragmentisbeingconstructedBynowpJL9vectorcontainingapositiveselectionmarkerwhichflankedby4373bpleftand3936bp，，righthomologousfragmentwassuccessfullyconstructed。，23resistantcalluswereobtai，nedaft

6、ertransformationof15425gricecalluswithBeltargetingvectorpRB2andthen28riceweredifferentiatedfromthoseresistantcallusItWasidentifiedusingthePCRmethodthat27outof28differentiated’plantsaretransgenicricebutitwasalsofoundthatt

7、heforeigngenewasrandominsertedinricegenomewithouthomologousrecombination3Agrobacterim—mediatedgenetictransformationsystemofShijinBsuspensioncellsWasestablishedThecalluswereinducedbythematureseedsofShijinB，whichfollowedby

8、suspensionculturedtOobtaindynamiccellsCellsweremanipulatedasfollows：preculturedforaweek；COculturedinN6IImedium；transferredtoN6Imediumincludingcefotaxime250m嘰carbenicillin250mg化hygromycin50mg／Lforscreening；transferredonto

9、MSICmediumfordifferentiationPlantletscomingfromresistantcallusweretransferredtoMSIImediumPCRamplificationindicatedthattheexogenousgenehadbeenintroducedintothericegenomeKeyWords：Belgene；genetargeting；Agrobacteriummediated

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