禽呼腸孤病毒L2基因的克隆與序列分析.pdf

1、本試驗(yàn)提取禽呼腸孤病毒天津地區(qū)分離株（ARV T-98）和內(nèi)蒙古地區(qū)分離株（ARV C-98）病毒的總RNA。參考GenBank中禽呼腸孤病毒176株（ARV176）的L2基因序列設(shè)計(jì)了5對特異性引物。應(yīng)用一步法RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增禽呼腸孤病毒的L2基因。將回收純化得到的目的DNA與pEASY-T1載體鏈接，轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞，用藍(lán)白斑法篩選陽性重組質(zhì)粒，再用PCR法鑒定陽性重組質(zhì)粒，然后將PCR鑒定為陽性的重組質(zhì)粒送英濰捷基（上海）貿(mào)易

2、有限公司（invitrogen）進(jìn)行序列測定。應(yīng)用DNAstar軟件將測定序列進(jìn)行拼接并與參考序列進(jìn)行比較分析。結(jié)果顯示L2基因節(jié)段長3830bp，均含有完整的開放性閱讀框(Open Reading Frame，ORF)，編碼區(qū)位于15～3794bp。測定的禽呼腸孤病毒C-98、T-98株的L2基因序列已經(jīng)登錄GenBank，登錄號分別是JN641888、JN641889。
　　ARV C-98和ARV T-98的L2基因核苷酸及

3、其推導(dǎo)的氨基酸的同源性均很高，分別為99.7％，99.4%；與ARV176、ARV S1133、ARV138、和ARV AVS-B的L2基因核苷酸同源性在83.9%～99.7%之間，推導(dǎo)的氨基酸同源性在96.4%～99.6%之間；與MRV BYD1、MRV SC-A、MRV T3D和MRV T4N的L1基因核苷酸同源性在53.4%～54.4%之間，推導(dǎo)的氨基酸同源性在53.9%～54.4%之間。系統(tǒng)發(fā)生樹表明，ARV C-98、ARV