蝗綠僵菌耐熱突變菌株篩選.pdf

1、昆蟲病原真菌高效殺蟲制劑的研發(fā)、規(guī)模化生產(chǎn)及田間應(yīng)用穩(wěn)定性是綠色防治蟲害的關(guān)鍵。高效真菌殺蟲劑的田間應(yīng)用的核心限制因素是孢子的毒力,而毒力取決于孢子本身特性與田間環(huán)境適應(yīng)能力。因此,研究環(huán)境適應(yīng)相關(guān)的抗逆特性對(duì)于構(gòu)建與應(yīng)用高效殺蟲工程菌株是非常重要的。
　　昆蟲病原真菌作為極具潛力的綠色生防資源備受關(guān)注,但因其殺蟲速度較慢,受環(huán)境影響大,貨架期短等不足,限制了其大規(guī)模的田間應(yīng)用。近年來,利用現(xiàn)代分子生物學(xué)手段等先進(jìn)技術(shù),昆蟲病原真

2、菌特別是綠僵菌的基因功能研究取得了一系列的基礎(chǔ)性理論研究結(jié)果。但高效殺蝗蟲真菌工程菌選育的進(jìn)展還不夠理想。因此,有必要利用更多有效的手段與技術(shù)來選育高效的殺蝗真菌工程菌株,而傳統(tǒng)的誘變育種可以直接誘導(dǎo)殺蟲活性成分孢子的誘變而直接提高其殺蝗效果,具有其獨(dú)特的育種優(yōu)勢。
　　昆蟲病原真菌在田間應(yīng)用時(shí)會(huì)遭遇各種環(huán)境壓力的脅迫,如高溫、干旱、紫外線等。而溫度是很重要的一個(gè)影響因素,高溫對(duì)孢子萌發(fā)與生長的影響、對(duì)孢子制劑的貨架保質(zhì)期的影響、

3、對(duì)孢子田間應(yīng)用后流行病形成的影響。特別是高溫可誘導(dǎo)孢子遺傳物質(zhì)的損傷與變異。此外,殺蟲靶標(biāo)蝗蟲還會(huì)通過改變其體表溫度而影響昆蟲病原真菌的侵染。因此,溫度幾乎在生物防治的整個(gè)過程都有重要的影響;所以,選育耐高溫的昆蟲病原真菌菌株具有重要的價(jià)值。
　　熱激育種是一種具有其獨(dú)特優(yōu)勢的育種方法,它不僅可以進(jìn)行熱誘變,而且還可以進(jìn)行定向的熱條件篩選,具有高效篩選高效殺蟲真菌工程菌株的潛力。
　　本研究主要結(jié)果有:
　?、贅O限熱激

4、溫度點(diǎn)確定熱激最高溫度點(diǎn)的選擇依據(jù)是該溫度點(diǎn)熱激2h后28℃培養(yǎng)只能長出極少數(shù)的單菌落,而更高的溫度點(diǎn)熱激2h后28℃培養(yǎng)沒有菌落生長的臨界點(diǎn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn),最高熱激溫度從45.0℃的溫度梯度實(shí)驗(yàn),到50.0℃、53.0℃、55.0℃,確定最終熱激最高溫度點(diǎn)為57.2℃。
　?、诤Y選耐高溫突變菌株利用57.2℃進(jìn)行熱激誘變,第一次熱激后篩選出M1、M2和M33個(gè)突變單菌落。擴(kuò)大培養(yǎng),用成熟的孢子進(jìn)行第二次熱激誘變,篩選