鱗翅目蔬菜害蟲殺蟲綠僵菌菌株的篩選、鑒定及培養(yǎng)條件研究.pdf

1、以菜青蟲、小菜蛾、夜蛾及螟蛾為代表的鱗翅目害蟲是危害蔬菜的主要害蟲，尤其威脅十字花科、豆科、茄瓜類以及旋花科蔬菜的生長、產(chǎn)量和商品品質(zhì)。長期以來，人們?yōu)榱朔乐芜@些害蟲，連續(xù)大量地使用化學(xué)農(nóng)藥，頻繁地更換農(nóng)藥種類，甚至于使用高毒、劇毒農(nóng)藥，直接威脅到人類健康，使害蟲的抗藥性越來越強(qiáng)，防治成本越來越高,而且造成對(duì)環(huán)境和生物多樣性的極大傷害，因此生物農(nóng)藥逐漸受到了廣泛關(guān)注。金龜子綠僵菌是一類重要的生防真菌，其具有的多樣性菌株對(duì)多種害蟲具有或廣

2、譜或?qū)Ｒ坏臍⑾x活性，有不污染環(huán)境、無殘留、對(duì)人畜無害、害蟲不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)越來越廣泛地用于蔬菜害蟲以及多種作物及林木害蟲的生物防治。
　　 本研究從實(shí)驗(yàn)室收集的多個(gè)殺蟲綠僵菌菌株中，以4種鱗翅目蔬菜害蟲為對(duì)象，篩選具有毒力高、殺蟲譜廣的金龜子綠僵菌菌株,并對(duì)所篩選出的菌株的生物特征、分類學(xué)地位、培養(yǎng)條件、殺蟲毒力等進(jìn)行了研究，并根據(jù)蔬菜害蟲特點(diǎn)對(duì)菌株制劑進(jìn)行了初步探索。由于該菌株對(duì)蠐螬也有良好殺蟲作用，本研究還對(duì)該制劑

3、對(duì)蠐螬的殺蟲效率進(jìn)行了初步測(cè)試。主要研究結(jié)果如下：①從現(xiàn)存菌株中篩選出一株對(duì)多種鱗翅目害蟲有良好殺蟲活性的綠僵菌菌株CQMa128。根據(jù)菌株的形態(tài)特征、生物學(xué)特征和rDNA 序列比對(duì)結(jié)果，確定了該菌株的分類學(xué)地位為金龜子綠僵菌大孢變種（Metarihzium anisopliae var.majus）。②以CQMa128菌株孢子懸液用點(diǎn)滴法分別接種菜青蟲、小菜蛾、玉米螟、家蠶4 齡幼蟲，1.0 x 108 mL-1 濃度的孢懸液對(duì)菜青蟲

4、、小菜蛾、玉米螟的校正死亡率分別為100％、83.3％、76.7％，而家蠶的累計(jì)死亡率僅為10％,低于此濃度家蠶死亡率極低，和空白對(duì)照沒有顯著差異。證明該菌株對(duì)菜青蟲、玉米螟、小菜蛾有很高侵染能力與殺蟲活性，而對(duì)家蠶相對(duì)安全。將所獲生測(cè)數(shù)據(jù)建立了CQMa128菌株與四種鱗翅目昆蟲的時(shí)間-劑量-死亡率模型(time-dose-mortalitymodel TMD)，分析顯示，所建模型均通過Hosmer-Lemeshow 擬合異質(zhì)性檢驗(yàn)，并

5、由模型估計(jì)出了該菌株對(duì)鱗翅目昆蟲的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。③通過單因素試驗(yàn)，測(cè)試了不同pH、碳源、氮源及微量元素對(duì)金龜子綠僵菌CQMa128菌株液體發(fā)酵生長和產(chǎn)孢的影響，確定了其生長和產(chǎn)孢的最適單因素培養(yǎng)條件參數(shù)，該菌株的最適生長PH 為7.0、最佳碳源為蔗糖、最佳氮源為酵母膏，添加0.01％的Mg2+能夠最大促進(jìn)該菌株的生長與產(chǎn)飽。在此基礎(chǔ)上，通過碳源、氮源及微量元素3個(gè)水平的正交試驗(yàn)，確定菌株的最佳液體培養(yǎng)條件為：最適培養(yǎng)液pH 為7.

6、0，1L 培養(yǎng)液中以10.0g 蔗糖為碳源、3g 酵母膏為氮源、1.5g蛋白胨并添加0.01％Mg2+的營養(yǎng)配方，可以使CQMa128菌株產(chǎn)孢量比基礎(chǔ)培養(yǎng)基增加一倍，生物量增加51.9％。為大規(guī)模真菌農(nóng)藥生產(chǎn)提供依據(jù)。④對(duì)多種常用表面活性劑進(jìn)行了篩選，從中篩選出能有效分散孢子，延長孢子保存時(shí)間的表面活性劑SP80、 T80.助劑、色拉油與孢子粉的重量百分比最佳的比例分別為8％、25％-30％、60％-70％，獲得了在水中分散性好、萌發(fā)率