濁點(diǎn)萃取-高效液相色譜法檢測(cè)牛奶中的喹諾酮類抗生素.pdf

1、我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)近些年來飛速發(fā)展，畜牧業(yè)也呈現(xiàn)出良好的發(fā)展勢(shì)頭，但與此同時(shí)動(dòng)物性食品中獸藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象日益突出，對(duì)人類健康和環(huán)境安全構(gòu)成威脅，也影響國(guó)家對(duì)外經(jīng)濟(jì)貿(mào)易。近幾年各國(guó)政府相繼建立并不斷完善動(dòng)物性食品的獸藥殘留監(jiān)測(cè)體系，限量標(biāo)準(zhǔn)日趨嚴(yán)格，這無疑對(duì)動(dòng)物性食品中的獸藥多殘留分析方法提出了高效、經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確的要求。
　　喹諾酮類藥物是畜牧業(yè)中應(yīng)用廣泛的抗微生物藥劑，在動(dòng)物源食品中的過量或不當(dāng)使用會(huì)導(dǎo)致誘導(dǎo)耐藥菌株的產(chǎn)生，造成食

2、用者腸道菌群失衡，帶來潛在“三致”（致癌、致畸、致突變）作用，從而威脅人類健康。目前喹諾酮類獸藥殘留檢測(cè)方法多有報(bào)道，但通常前處理技術(shù)操作復(fù)雜、使用有機(jī)溶劑量大，對(duì)環(huán)境造成一定負(fù)擔(dān)。濁點(diǎn)萃取技術(shù)作為一種經(jīng)濟(jì)、環(huán)保的新興樣品前處理方法，與傳統(tǒng)的溶劑萃取方法相比具有有機(jī)溶劑消耗量少、萃取效率高、操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，能適應(yīng)現(xiàn)代分析化學(xué)的發(fā)展要求。本文研究并確立了對(duì)牛奶中的喹諾酮類抗生素進(jìn)行萃取、富集并進(jìn)行高效液相色譜分析的條件，建立了濁點(diǎn)萃取-高

3、效液相色譜法檢測(cè)牛奶中喹諾酮類抗生素的理想方法。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　(1)建立了濁點(diǎn)萃取技術(shù)對(duì)牛奶中喹諾酮類目標(biāo)物進(jìn)行富集分離的方法，包括破乳方式和濁點(diǎn)萃取方法。確定了冰乙酸的用量為0.15 mL及無水硫酸鈉添加量為0.95g，離心參數(shù)為5℃、10000 r/min條件下離心10 min的最佳破乳條件;以80 g/LTween20水溶液為萃取劑，濃氨水的體積為60μL，正丁醇、無水硫酸鈉的添加量為0.2 mL和0.

4、25 g，平衡溫度和時(shí)間為50℃和30 min的濁點(diǎn)萃取條件。利用此技術(shù)在0.05、0.1、0.2 mg/L三個(gè)水平上對(duì)供試牛奶進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:6種喹諾酮類藥物在優(yōu)化條件下的添加回收率在71.3％～96.8％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.24％～6.02％之間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，符合藥物殘留檢測(cè)的要求。
　　(2)將目標(biāo)物進(jìn)行高效液相色譜-紫外檢測(cè)器分析，確定了色譜條件:以0.1％的甲酸水溶液(A)和乙腈(B)為

5、流動(dòng)相，流速1 mL/min，選用反相色譜柱InertsilODS-3(4.6 mm×150 mm，5μm)，柱溫35℃，在紫外檢測(cè)器下采用二元高壓梯度洗脫:(B)起始量為12％，20 min內(nèi)升為18％，20.01 min突變?yōu)?8％并在37 min時(shí)升至40％;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)在前20 min為280 nm，20.01 min突變?yōu)?50 nm并保持。在此條件下樣品中目標(biāo)物分離良好，無雜峰干擾;各藥物標(biāo)準(zhǔn)品在0.05～2μg/mL范圍內(nèi)