桉樹青枯病的快速檢測及生物防控技術(shù)研究.pdf

1、桉樹(Eucalyptus)青枯?。≧alstoniasolanacearum）是我國桉樹人工林生產(chǎn)的重要病害。廣東、廣西及海南三省是我國桉樹人工商品林主產(chǎn)區(qū)，種植面積達280萬hm2，占我國桉樹人工林總面積的76％，隨著桉樹人工林的不斷增加，青枯病的發(fā)生日趨嚴(yán)重，已成為當(dāng)前發(fā)展桉樹生產(chǎn)的主要障礙之一。因此，通過對我國桉樹人工林主產(chǎn)區(qū)發(fā)病桉樹無性系的研究，以期為生產(chǎn)提供有理論依據(jù)的快速鑒定方法，有效地控制病原菌的進一步傳播。
　　

2、 本研究對11株病原菌形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)特征、桉樹組培苗潛伏期及輕基質(zhì)中青枯菌的PCR快速檢測、以及抗青枯桉樹無性系的測定及多粘類芽孢桿菌生防效果研究等幾個方面進行了研究，為桉樹青枯病早期的快速檢測和后期防治提供一定的理論指導(dǎo)和技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)本研究采集了我國華南沿海三省桉樹主產(chǎn)區(qū)共11株病原菌，系統(tǒng)的鑒定了其細(xì)菌學(xué)特征、生物型、形態(tài)特征及分子生物學(xué)特征。研究結(jié)果表明，桉樹青枯病是由Ralstonia

3、solanacearum病原菌引起，分離獲得的病菌進行致病性的初步測試，接種桉樹組培苗后，能觀察到與林間自然發(fā)病癥狀一致。不同菌株間致病性差異顯著(P＜0.01和P＜0.05)，采用K-均值聚類分析法（K=3），以發(fā)病高峰期、高峰期發(fā)病率和平均發(fā)病率為變量，結(jié)果表明HY01、HY02、DA01、HP04和HP05聚為一類，DA02和DA03聚為另一類，其余為第三類。四個不同采樣點的發(fā)病率方差分析結(jié)果表明，廣東陽江來源菌株與其他三個來源地

4、間致病性差異顯著(P＜0.01)。
　　 (2)本研究采用以苯酚紅為指示劑的方法，研究結(jié)果表明其中10株屬于生物型3，另一株HP03無法歸類到相應(yīng)的生物型。根據(jù)Seal等以16SrRNA為靶基因的青枯菌特異性引物序列OLI1/Y2，能在4h小時內(nèi)準(zhǔn)確快速的擴增出單一的特異性條帶，為檢測及進一步研究有效控制病原菌的攜帶和傳播提供了理論依據(jù)。
　　 (3)為了實現(xiàn)桉樹組培苗和輕基質(zhì)帶菌情況的早期快速檢測，將不同濃度青枯菌懸液

5、人工接種于桉樹組培苗和輕基質(zhì)中，利用特異性寡核苷酸引物OLI1/Y2，能快速的檢測出潛伏期組培苗，以及帶菌輕基質(zhì)中青枯菌的數(shù)量。檢測結(jié)果表明:試劑盒法提取基因組DNA純度較高，A260/280均在1.7-1.9之間。桉樹組培苗組織和輕基質(zhì)中檢測限分別為102cfu·mL-1和103cfu·mL-1。因此，潛伏期PCR快速檢測法為預(yù)防病原菌的進一步傳播提供了新的思路。
　　 (4)采用傷根法對3種常用桉樹無性系組培苗進行初步的抗青