煙草青枯病拮抗菌的篩選及其生防應(yīng)用研究.pdf

1、煙草青枯病是一種細(xì)菌性病害，能夠?qū)е聼煵莓a(chǎn)生毀滅性的經(jīng)濟(jì)損失，該病在熱帶、亞熱帶煙草種植區(qū)廣泛存在，在我國南方煙區(qū)每年普遍發(fā)生，危害嚴(yán)重。近幾年，由于全球氣候變化和農(nóng)業(yè)耕作模式的改變，安徽皖南煙區(qū)青枯病常常大面積發(fā)生，不僅給煙農(nóng)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且也極大地制約了煙草行業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。為篩選煙草青枯病的有效生防菌，探索新的生物防治技術(shù)，本研究主要從安徽皖南煙區(qū)采集的土壤中進(jìn)行拮抗菌的篩選工作，共分離篩選出了6株對青枯菌抑制效果較好

2、的生防菌，并對其進(jìn)行了鑒定、發(fā)酵以及防效等相關(guān)研究，研究的內(nèi)容主要包括以下幾點(diǎn):
　　1、采用濾紙片法篩選出XC1、XC2、XC3、XC4、XC5和DZ1菌株，6株拮抗菌株對青枯菌有較強(qiáng)抑制作用，其中XC4菌株抑菌效果穩(wěn)定且較好，抑菌圈直徑為12.5 mm，因此將XC4菌株作為后續(xù)相關(guān)研究的主要對象。根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性測定、分子鑒定和美國Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，確定了XC4菌株為綠褐色鏈霉菌Streptomyces

3、viridobrunneus。
　　2、本實驗主要對XC4菌株的發(fā)酵條件進(jìn)行了初步探究，通過單因素優(yōu)化試驗確定了XC4菌株的最佳發(fā)酵條件。優(yōu)化后的發(fā)酵工藝參數(shù)為發(fā)酵時間48 h，發(fā)酵溫度30℃，pH值7.0，接種量2％，轉(zhuǎn)速190 r/min，以牛肉膏為碳源，胰蛋白胨為氮源時，拮抗菌XC4菌株發(fā)酵液的抑菌效果最好。發(fā)酵條件經(jīng)初步優(yōu)化后，XC4菌株對青枯菌的抑菌圈直徑由原來的12.5 mm增至21.5 mm，比優(yōu)化前提高了72％。<

4、br>　　3、通過對6株拮抗菌之間的親和性研究發(fā)現(xiàn)，XC4菌株與拮抗菌XC1、XC2、XC3和DZ1菌株為部分親和，與XC5菌株完全不親和;將XC4菌株菌懸液分別同其他5株拮抗菌混合后測試對青枯菌的抑制效果，結(jié)果表明拮抗菌XC4提高了XC1、XC2、XC3單菌對青枯病病原菌的抑制效果，但差異不顯著，XC4+XC5組合抑菌效果最差，抑菌圈直徑僅為3.3 mm。
　　4、利用抗性標(biāo)記的方法，通過逐步提高利福平的濃度篩選出6株拮抗菌的突

5、變菌株XC1Rif、XC2Rif、XC3Rif、XC4Rif、XC5Rif和DZ1Rif，作為后期定殖能力測定的抗性菌株。實驗研究了不同接種方式（拌土、灌根、葉面噴施）和不同接種時期（苗床期、移栽期、團(tuán)棵期）對拮抗菌XC4Rif在煙草土壤和根部的定殖能力的影響，XC4Rif菌株不同接種方式定殖能力強(qiáng)弱為:拌土＞灌根＞葉面噴施，拌土處理XC4Rif菌株定殖效果最好，但在田間操作不方便，所以灌根的方法比較可行;煙苗長至團(tuán)棵期用XC4Rif菌

6、株灌根處理，拮抗菌在土壤中和根部定殖數(shù)量分別于灌根后第21 d和35 d達(dá)到峰值，為6.92 lg·cfu/g和2.40 lg·cfu/g，好于移栽期和苗床期處理。本實驗還系統(tǒng)研究了XC4Rif和其他5株拮抗菌突變菌株混合接種在煙草土壤和根部的定殖情況，混合拮抗菌的定殖效果要好于XC4Rif單菌處理，其中XC4Rif+XC3Rif組合相較于其他組合最好。
　　5、研究了拮抗菌XC4菌株對云煙87和云煙97的促生作用，結(jié)果顯示該菌對