大豆疫霉組蛋白乙酰轉移本科相關基因PsGCN5的克隆與功能分析.pdf

1、大豆疫霉(Phytophthorasojae)是大豆生產(chǎn)中具有毀滅性的植物病原菌之一,每年導致全球大豆生產(chǎn)的嚴重減產(chǎn)。近幾年隨著利用RNA干擾技術(RNAi)在大豆疫霉的轉化體系的逐漸成熟和大豆疫霉全基因組測序的完成,大豆疫霉已經(jīng)成為了研究卵菌中相關功能基因的模式菌株。
　　組蛋白乙?；D移酶(Histoneacetyltransferase,HATs)在生物體中具有重要的作用,通過與組蛋白去乙酰基酶(HistoneDeacety

2、lase,HDAC)的相互作用實現(xiàn)了生物體內基因組整體水平的調控。HATs和HDAC主要通過對組蛋白中H3、H4核心組蛋白中Lys殘基的乙?；腿ヒ阴；?實現(xiàn)調控不同功能基因的表達。目前對HATs研究較多的為GCN5基因,它是HATs家族中具有代表性的一種調控基因。在疫霉屬中,GCN5編碼的氨基酸殘基具有高度的同源性,特別是在編碼的蛋白結構域和組蛋白乙酰賴氨酸殘基結合位點在內的345個氨基酸同源性在97％以上,但是GCN5編碼的氨基酸序

3、列在不同物種之間卻具有明顯的差異性。
　　通過對大豆疫霉無性生活史階段以及侵染階段中PsGCN5的qRT-PCR分析表明,PsGCN5在無性生活史各個時期相對于菌絲階段表達量均處于下調狀態(tài),而在侵染階段后期有一定程度的上調,在侵染時間為12h時,其表達量具有明顯的上調變化,約為菌絲階段的2.8倍,說明在大豆疫霉侵染階段后期起到正調控作用。
　　本實驗通過擴增大豆疫霉中PsGCN5氨基酸殘基的保守編碼基因序列,構建PsGCN5

4、沉默表達載體,利用PEG介導的大豆疫霉轉化實驗獲得該基因的沉默突變體并命名為T37,T66,T68,對該菌株提取RNA并利用qRT-PCR驗證得出,通過篩選的沉默突變體具有良好的沉默抑制效果。
　　在利用已獲得的沉默突變體進行表型分析結果中得出,在10%V8培養(yǎng)基中培養(yǎng)條件下,沉默突變體的生長情況無明顯差異變化,且其游動孢子的形成和萌發(fā)率以及卵孢子的形成也未發(fā)生變化。在含有5mMH2O2、0.01%SDS和0.7MNaCl的10%