刺糖多孢菌胞內(nèi)代謝物L(fēng)C-MS分析與多殺菌素分離純化工藝研究.pdf

1、多殺菌素是由刺糖多孢菌生產(chǎn)的一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)農(nóng)用抗生素,兼具出色的殺蟲(chóng)效果和環(huán)保特性。
　　優(yōu)化了刺糖多孢菌代謝組學(xué)的樣品處理方法,采用冷甲醇滅活、液氮研磨、冷甲醇提取的方式來(lái)處理刺糖多孢菌代謝組學(xué)研究的樣品。經(jīng)LC-MS檢測(cè)以后,從樣品中可以檢測(cè)得到143種代謝物,并對(duì)其中61種進(jìn)行定性和定量研究。
　　采用代謝組學(xué)的研究平臺(tái),以野生刺糖多孢菌WT作為對(duì)照,對(duì)誘變和代謝工程改造得到的兩株高產(chǎn)菌WH124和LU104進(jìn)行了代謝

2、物組層面的對(duì)比和分析。對(duì)檢測(cè)的數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析和聚類(lèi)分析結(jié)果表明,WH124在發(fā)酵初期大量的代謝中間物,如中心碳代謝中間體,氨基酸等初級(jí)中間代謝物的水平較高,WT次之,而在LU104中這些化合物水平最低。這反映出WH124和LU104在提高多殺菌素合成方面的機(jī)制是不同的。利用主成分分析,初步鑒定出9種對(duì)區(qū)分三株菌有顯著作用的生物標(biāo)志物,它們分別是PSA,谷氨酸,谷氨酰胺,纈氨酸,琥珀酸,α-酮戊二酸,ATP,乙酰輔酶A以及四氫嘧啶。<

3、br>　　建立了大孔樹(shù)脂法提取發(fā)酵液中多殺菌素的生產(chǎn)工藝。從多種大孔吸附樹(shù)脂中選出HDP100作為最佳吸附樹(shù)脂,發(fā)酵液優(yōu)化的吸附pH為9-11,并篩選出丙酮和乙酸乙酯作為最佳的洗脫溶劑。發(fā)酵液動(dòng)態(tài)吸附過(guò)程的最佳流速經(jīng)優(yōu)化后選擇60mL/h,并研究了多殺菌素的梯度洗脫實(shí)驗(yàn),確定洗脫梯度為:8mL去離子水,8mL30％丙酮水溶液(v/v),8mL60%丙酮水溶液,最后用95%丙酮(2mM甲酸銨)或乙酸乙酯進(jìn)行洗脫,最終多殺菌素的提取收率分別