加拿大進(jìn)境馬鈴薯有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析及RT-PCR病毒檢測技術(shù)研究.pdf

1、作為馬鈴薯種植大國，目前我國馬鈴薯種植面積和總產(chǎn)量均位居世界第一位。但我國的馬鈴薯產(chǎn)業(yè)基本還處于一種自發(fā)的無序狀態(tài)，與國外種薯質(zhì)量差異巨大，各種馬鈴薯病害發(fā)生情況嚴(yán)重。因此，引進(jìn)及培育優(yōu)質(zhì)馬鈴薯品種成為馬鈴薯生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)。從境外引種前必須進(jìn)行科學(xué)有效的有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析，以保護(hù)我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、生態(tài)安全。其次，馬鈴薯病毒病傳播引起的產(chǎn)量下降、品質(zhì)變劣、減產(chǎn)等是制約馬鈴薯生產(chǎn)的主要因素之一。因此，需要建立一套快速，準(zhǔn)確，靈敏的病毒檢測方法，以

2、保證種薯品質(zhì)。本研究通過有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析對從加拿大引種馬鈴薯進(jìn)行了合理的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測，并確立了科學(xué)有效的風(fēng)險(xiǎn)管理措施，降低了引種風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)建立了5種馬鈴薯病毒的單重、雙重、三重RT-PCR檢測體系并測定了檢測靈敏度。
　　 根據(jù)FAO制定的《有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析準(zhǔn)則》，從傳播途徑開始進(jìn)行有害生物風(fēng)險(xiǎn)分析，初步提出了加拿大進(jìn)境馬鈴薯種薯上的有害生物種類和數(shù)量，為172種。根據(jù)有害生物的地理分布、官方控制、經(jīng)濟(jì)重要性、種薯傳帶的可能性等綜合

3、指標(biāo)進(jìn)行初步評估，篩選出進(jìn)境馬鈴薯種薯潛在的限定有害生物(PRP)和非限定有害生物(NRP)。對進(jìn)境馬鈴薯種薯潛在的PRP,根據(jù)有害生物傳入、定殖、擴(kuò)散的可能性以及潛在的影響等進(jìn)行詳細(xì)的風(fēng)險(xiǎn)評估，確定了加拿大國進(jìn)境馬鈴薯上潛在的檢疫性有害生物(QP)和限定的非檢疫性有害生物(RNQP)。分析確定QP共24種、RNQP共22種。
　　 本試驗(yàn)選取5種有較高引種風(fēng)險(xiǎn)的馬鈴薯病毒--馬鈴薯M病毒(PVM)、馬鈴薯Y病毒(PVY)、馬鈴

4、薯A病毒(PVA)、馬鈴薯S病毒(PVS)，馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)進(jìn)行RT-PCR檢測。利用試劑盒法、RNAiso Plus試劑法提取馬鈴薯病毒RNA，結(jié)果表明兩者提取的RNA純度高且完整性較好，滿足RT-PCR檢測的要求。根據(jù)NCBI報(bào)道的病毒全基因組序的保守區(qū)域序列設(shè)計(jì)了PLRV特異性引物對，采用單重RT-PCR對馬鈴薯卷葉病毒進(jìn)行了擴(kuò)增，擴(kuò)增片斷大小為850bp?；厥詹《镜膯沃?cái)U(kuò)增產(chǎn)物并測序，經(jīng)NCBI BIAST同已報(bào)道的病