磺胺氯吡嗪單克隆抗體的制備.pdf

1、磺胺藥抗菌譜廣，是目前應(yīng)用比較廣泛的一類抗菌藥，人們在實際生產(chǎn)中不合理地使用磺胺類藥物，會使其殘留在動物性食品中，對人類身體健康造成危害。世界上很多國家都對食品中磺胺類藥物作了最高殘留限量（ MRL）的規(guī)定，有的國家甚至規(guī)定不得檢出磺胺類藥物。目前，在獸藥殘留檢測技術(shù)中免疫分析技術(shù)具有靈敏度高、快速、方便簡捷的特點，適宜現(xiàn)場篩選和大量樣品快速分析，免疫分析技術(shù)的核心是單克隆抗體，本研究目的在于制備磺胺氯吡嗪（SPZ）人工抗原，利用單克隆

2、抗體技術(shù)建立能分泌抗磺胺氯吡嗪單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，為建立其免疫學(xué)快速檢測方法奠定基礎(chǔ)。
　　本研究采用重氮化法將 SPZ分別偶聯(lián)于牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）上，合成免疫抗原 BSA-SPZ和檢測抗原 OVA-SPZ，通過紫外掃描分析，掃描結(jié)果表明完全抗原與載體蛋白相比紫外吸收峰發(fā)生漂移，峰值發(fā)生改變，初步證實完全抗原合成成功；通過 SDS-PAGE電泳法完全抗原進(jìn)行了分析，載體蛋白的遷移速度大于完全抗原，載體

3、蛋白泳動條帶略低于完全抗原，說明完全抗原的分子量大于載體蛋白，進(jìn)一步表明完全抗原偶聯(lián)成功；對抗原進(jìn)行了免疫檢測，第2次免疫后經(jīng)10 d斷尾采血，取血清間接ELISA法測定小鼠血清效價。結(jié)果表明，1號和2號小鼠的血清效價都可達(dá)到 l:4000，進(jìn)一步說明偶聯(lián)成功；綜上可表明免疫抗原 BSA-SPZ及檢測抗原 OVA-SPZ適合用于免疫及后續(xù)的抗體制備。
　　用合成的人工抗原 BSA-SPZ免疫 BALB/c小鼠，通過檢測血清效價篩選