不同采收季節(jié)瓶爾小草黃酮類化合物含量分析

1、<p>　　不同采收季節(jié)瓶爾小草黃酮類化合物含量分析</p><p>　　作者：趙保發(fā) 張志信 張仕秀 黃保貴 沐建華</p><p>　　【摘要】 　　目的確定瓶爾小草的最佳采收季節(jié)。方法對夏（8月）、秋（10月）、冬（12月）三季節(jié)采收的瓶爾小草中的總黃酮進(jìn)行了提取，以蘆丁為對照品，用紫外分光光度法對其含量進(jìn)行了測定。結(jié)果不同季節(jié)采收的瓶爾小草中黃酮類化合物的含量有著顯著的

2、差異，夏季（8月）其含量為58.42(mg/g DW)，秋季（10月）為39.32(mg/g DW)，冬季（12月）為28.14(mg/g DW)。結(jié)論瓶爾小草的最佳采收季節(jié)應(yīng)為每年8月。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 瓶爾小草； 黃酮類化合物； 紫外分光光度法</p><p>　　Abstract：ObjectiveTo study the best harvest season

3、of Ophioglossum vulgatum L..MethodsThis paper reported the extraction and the preliminary determination of flavonoids in Ophioglossum vulgatum L. from the samples of August, October, December by UV-spectrophotometry with

4、 rutin as comparison sample.ResultsThe contents of flavonoids had significant difference in Ophioglossum vulgatum L. at different seassons. The highest flavonoid content in Ophioglossum vulgatum L. of August was 58.42(mg

5、/g DW) an</p><p>　　Key words：Ophioglossum vulgatum L.； Flavonoids； UV-spectrophotometry</p><p>　　瓶爾小草科植物瓶爾小草Ophioglossum vulgatum L.又稱一支箭、一支槍、獨(dú)葉一支箭、單槍一支箭、一矛一盾、矛盾草、蛇須草。以全草入藥，功能清熱解毒，消腫止痛。用于小兒肺炎、

6、脘腹脹痛、毒蛇咬傷、疔瘡腫毒；外用治急性結(jié)膜炎、角膜云翳、眼瞼緣炎。分布于東北、陜西、湖北、云南、貴州、廣西、臺灣及長江下游等地［1，2］。</p><p>　　黃酮類化合物廣泛存在于植物中，生理活性作用廣泛：維持血管正常的滲透壓、防止血管脆化，對多種炎癥、冠心病、心絞痛等均有良好的療效。同時，黃酮類化合物還是一種良好的活性自由基清除劑，具有調(diào)整免疫和內(nèi)分泌作用，還有抗癌、抗炎等多種醫(yī)療保健作用，是一類重要的生物

7、活性因子。瓶爾小草的葉中主要含3-O-甲基槲皮素-7-O-雙葡萄糖苷-4'-O-葡萄糖苷，其功效與黃酮類化合物有著密切關(guān)系。本研究探討了瓶爾小草中總黃酮Total flavones of Ophioglossum vulgatum L.（FOV）的提取、測定,分析了瓶爾小草中總黃酮隨季節(jié)的變化，以期為充分利用瓶爾小草資源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。</p><p><b>　　1 器材</b>&

8、lt;/p><p>　　1.1 儀器UV-160紫外分光光度計（日本島津）；AEL-40SM十萬分之一天平（日本島津）；干燥箱CS-101-2CS（重慶實(shí)驗(yàn)儀器廠）；微波爐，Midea PJ21F-B(C2)。</p><p>　　1.2 試劑蘆丁對照品購于中國藥品生物制品檢定所；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純。</p><p>　　1.3 藥材瓶爾小草全株

9、于2006年8，10，12月采集于云南文山縣楊柳井，經(jīng)云南文山師范高等?？茖W(xué)校沐建華講師鑒定，每次采樣3次重復(fù)。</p><p><b>　　2 方法</b></p><p>　　2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作［3］精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對照品10 mg用20 ml乙醇溶解后，轉(zhuǎn)移到100 ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻即得（每毫升溶液中含無水蘆丁0.1 mg）

10、。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 ml。分別置于50 ml容量瓶中，各加水至12 ml，加5%NaNO2溶液2 ml，混勻，放置6 min,加10%Al(NO3)3溶液2 ml，混勻，放置6 min,加4%NaOH 20 ml,再加水至50 ml，放置15 min,以不加蘆丁對照品的試劑作空白對照。按分光光度法［4］在503 nm（全波長掃描，在503 nm處有最大吸收）波長處測定吸光度。以

11、所取標(biāo)準(zhǔn)液含有的蘆丁標(biāo)樣量mg數(shù)和吸光度數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理，得到回歸方程,回歸方為程：Y=0.219 6X-0.011 2，相關(guān)系數(shù)r=0.999 3。</p><p>　　2.2 黃酮類化合物的提取和測定方法［5］瓶爾小草粉碎（過60目篩），稱取5 g，用70%乙醇溶液為溶劑，浸泡24 h，微波提取10 min（微波加熱2 min，間隔1 min，用于補(bǔ)充溶劑損耗），抽濾，提取液用70%乙醇溶液定容至200 ml

12、，取1 ml按“2.1”項(xiàng)下方法測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算出1 ml提取液中的總黃酮的mg數(shù)，按下式計算瓶爾小草中的黃酮含量(mg/g DW)。</p><p>　　樣品中的總黃酮含量（以蘆丁計）： 總黃酮含量（mg/gDW）=200CW </p><p>　　式中：C為1 ml樣品液含總黃酮量(mg)，W為樣品的質(zhì)量(g)。</p><p>　　2.3 回收

13、率的測定準(zhǔn)確稱取夏季采收的瓶爾小草樣品5 g，共3份，分別加入一定量的蘆丁對照品，按“2.2”操作。用紫外分光光度計測定吸光度，得出總黃酮含量，根據(jù)回收率公式計算出回收率。</p><p>　　回收率（%）=混合后測得總黃酮含量-樣品中總黃酮含量蘆丁對照品加入量×100%</p><p>　　2.4 精密度實(shí)驗(yàn)精密稱取夏季瓶爾小草干粉樣品5 g，共6份，按“2.2”測定。<

14、;/p><p><b>　　3 結(jié)果</b></p><p>　　3.1 提取溶劑乙醇濃度的選擇對于總黃酮的提取率與醇溶液的濃度及黃酮類型的不同而有所差異，因此本實(shí)驗(yàn)做了乙醇濃度對黃酮類化合物提取率的影響的實(shí)驗(yàn)。取不同濃度的乙醇溶液對不同季節(jié)的瓶爾小草干粉，按照“2.2”項(xiàng)下方法分別提取和測定。結(jié)果見表1。</p><p>　　表1 乙醇濃度

15、對FOV提取的影響（略）</p><p>　　由表1可以看出，乙醇濃度為70%時，提取液中黃酮類化合物的提取率最高。本實(shí)驗(yàn)選擇70%的乙醇為溶劑。</p><p>　　3.2 微波提取次數(shù)實(shí)驗(yàn)將經(jīng)過“2.2”項(xiàng)下操作過濾后的殘渣，重復(fù)“2.2”項(xiàng)下操作兩次，過濾后分別收集各部濾液，并按照“2.1”項(xiàng)下方法測定各部濾液的吸光度。結(jié)果見表2。</p><p>　　表2

16、 微波提取次數(shù)對FOV提取的影響（略）</p><p>　　從表2可以看出，對樣品提取2次，不同季節(jié)的瓶爾小草中的黃酮類化合物提取完全。本實(shí)驗(yàn)選擇微波提取2次。</p><p>　　3.3 黃酮類化合物含量的測定分別稱取不同季節(jié)的瓶爾小草干粉3份，每份5 g，按“2.1”和“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行提取和測定。結(jié)果見表3。</p><p>　　從表3可以看出，夏、秋

17、、冬季節(jié)的瓶爾小草中，以夏季瓶爾小草中的黃酮類化合物含量最高，若對瓶爾小草中的黃酮類化合物開發(fā)利用，應(yīng)該選擇夏季進(jìn)行采收。3.4 樣品回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。由表4可以看出本實(shí)驗(yàn)的平均回收率為99.30%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）為2.457%。</p><p>　　表3 不同季節(jié)FOV的含量（略）</p><p>　　表4 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）</p><p>

18、;　　3.5 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。從表5可以看出，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.647%，結(jié)果顯示重復(fù)性較好，精密度較高。</p><p>　　表5 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）</p><p><b>　　4 討論</b></p><p>　　4.1 瓶爾小草黃酮類化合物含量的變化隨季節(jié)的不同，瓶爾小草的黃酮類化合物的含量有著顯著的差異，夏季其含量為5

19、8.42 mg/g DW，秋季為39.32 mg/g DW，冬季為28.14 mg/g DW。說明夏季是瓶爾小草黃酮類化合物含量最高時期即最佳采收期，這與瓶爾小草夏末秋初采收相符。這可能因?yàn)閺拈_春到夏季，隨著植物生長逐漸變得旺盛，其代謝活動也愈來愈旺盛，總黃酮含量呈現(xiàn)上升趨勢，到夏季達(dá)到高峰；到了秋、冬季節(jié)，氣溫降低、氣候干燥，其代謝受到抑制，瓶爾小草莖葉逐漸變黃枯萎，故從夏季到秋季，再到冬季，其總黃酮含量呈下降態(tài)勢［6］。</p

20、><p>　　4.2 提取測定方法穩(wěn)定可靠以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，具有簡便、穩(wěn)定、結(jié)果可靠的優(yōu)點(diǎn)，對進(jìn)一步開發(fā)利用瓶爾小草中黃酮類化合物很有實(shí)際價值。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　?。?］ 朱成蘭.云南常用中草藥彩色圖譜［M］.?？冢汉Ｄ铣霭嫔?，2003：203.</p><p>　?。?］

21、 范亞文，包文美，王全喜.中國瓶爾小草科植物孢子形態(tài)的研究［J］.西北植物學(xué)報，1997，17（6）：182.</p><p>　?。?］ 李文芳，黃美娥，唐純翼，等.甘薯地上部分黃酮類化合物含量變化［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18（2）：304.</p><p>　　［4］ 國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄VIB.</p>