尼羅羅非魚微衛(wèi)星標(biāo)記和SNPs標(biāo)記與生長(zhǎng)性狀的相關(guān)性研究.pdf

1、羅非魚（Tilapia）俗稱“非洲鯽魚”，原產(chǎn)非洲，屬于鱸形目（perciformes）、鱺魚科（cichlidae），共三屬，約100多種。自上世紀(jì)50年代，我國(guó)先后引進(jìn)了莫桑比克羅非魚、尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚等品種，至今已成為世界上最大的羅非魚養(yǎng)殖國(guó)家。但由于早先引進(jìn)的羅非魚基礎(chǔ)種群太小，有些還是從第三國(guó)引進(jìn)的，多存在遺傳瓶頸問(wèn)題；此外，由于羅非魚可以種間雜交并且后代可育，致使我國(guó)養(yǎng)殖羅非魚群體的遺傳漸滲或混雜現(xiàn)象比較嚴(yán)重，從而導(dǎo)

2、致羅非魚的種質(zhì)質(zhì)量急劇下降，出現(xiàn)了生長(zhǎng)速度減慢、性成熟年齡提前和繁殖力下降等一系列問(wèn)題，已大大制約我國(guó)羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。因此，培育出生長(zhǎng)速度快、性狀優(yōu)良的羅非魚品系是我國(guó)羅非魚養(yǎng)殖的當(dāng)務(wù)之急。 本論文旨在運(yùn)用微衛(wèi)星和SNPs分子標(biāo)記技術(shù)，進(jìn)行進(jìn)行標(biāo)記-性狀連鎖分析，尋找影響羅非魚生長(zhǎng)性狀的分子標(biāo)記，為羅非魚選育提供遺傳學(xué)依據(jù)，從而加速育種進(jìn)程、減少育種中的盲目性、提高育種效率，具有十分重要的理論和實(shí)踐指導(dǎo)意義。具體如下：

3、 1.與尼羅羅非魚生長(zhǎng)相關(guān)的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記的篩選和驗(yàn)證 利用SPSS軟件一般線性模型（GLM）對(duì)65個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)與尼羅羅非魚體重等主要生長(zhǎng)性狀進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，在鷺業(yè)群體中有8個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記（UNH130、UNH183、UNH911、GM558、UNH211、UNH176、UNH914和UNH974）與體重等主要生長(zhǎng)性狀顯著或極顯著相關(guān)（P<0.05或P<0.01），其中有2個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記（UNH914和UNH974）

4、與番禺群體的體重等主要生長(zhǎng)性狀顯著或極顯著相關(guān)（P<0.05或P<0.01），1個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記（UNH176）只與體重顯著相關(guān)（P<0.05）。對(duì)與生長(zhǎng)相關(guān)的標(biāo)記進(jìn)行多重比較，結(jié)果找到了對(duì)3種性狀有利的基因型或等位基因。 2.羅非魚MC4RcDNA和基因組DNA的克隆黑素皮質(zhì)素受體-4（Melanocortinreceptor-4，MC4R）是5種已被發(fā)現(xiàn)的黑素皮質(zhì)素受體家族成員之一，屬于跨膜G-蛋白耦聯(lián)受體超級(jí)家族，對(duì)于調(diào)節(jié)動(dòng)物

5、的采食量、體重及能量穩(wěn)態(tài)有著重要的作用。應(yīng)用RT-PCR和RACE技術(shù)首次獲得了尼羅羅非魚MC4R基因cDNA序列，全長(zhǎng)為1543bp，其中5'非編碼區(qū)為477bp，3'非編碼區(qū)為82bp，開放閱讀框（ORF）長(zhǎng)984bp，共編碼327個(gè)氨基酸，其蛋白等電點(diǎn)為8.17，相對(duì)分子量為36.7kD；應(yīng)用基因組步移技術(shù)獲得了MC4R基因組DNA序列，全長(zhǎng)為2547bp，其中5'側(cè)翼序列長(zhǎng)為148lbp，3'側(cè)翼序列長(zhǎng)為82bp，轉(zhuǎn)錄區(qū)序列長(zhǎng)為

6、984bp，只有一個(gè)外顯子。 3.羅非魚MC4R基因SNPs的篩選和關(guān)聯(lián)分析本研究采用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法、PCR-RFLP和CRS-PCR技術(shù)對(duì)尼羅羅非魚MC4R基因啟動(dòng)子和外顯子區(qū)域進(jìn)行了SNPs位點(diǎn)的檢測(cè)和分型，結(jié)果共檢測(cè)到5個(gè)SNPs位點(diǎn)（-G1000C、-T974A、C276T、C561T和C708T），其中外顯子上的3個(gè)SNPs位點(diǎn)均為同義突變。利用一般線性模型分析5個(gè)SNPs位點(diǎn)與尼羅羅非魚生長(zhǎng)性狀的關(guān)系，結(jié)果表明

7、，5個(gè)SNPs位點(diǎn)不同基因型之間體重均值差異最大值分別為9.5％、23.2％、14.4％、18.6％和13.5％，沒(méi)有達(dá)到顯著水平（P>0.05）。將5個(gè)SNPs位點(diǎn)不同基因型組合成7種雙倍型（去掉頻率小于3％的組合），關(guān)聯(lián)分析表明，在體重和體長(zhǎng)這兩個(gè)主要生長(zhǎng)性狀方面，雙倍型D4與D1、D3和D6存在顯著性差異（P<0.05），雙倍型D2與D3、D6也存在顯著性差異（P<0.05）。因而可以考慮將MC4R基因作為影響羅非魚體重等生長(zhǎng)性狀