柞蠶14-3-3蛋白基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、14-3-3蛋白是一類含量豐富的高度保守的酸性蛋白質(zhì),存在于真核生物細(xì)胞中.14-3-3蛋白是Moored等在分離牛腦蛋白的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的,后來(lái)陸續(xù)在許多真核生物中發(fā)現(xiàn)。14-3-3蛋白參與細(xì)胞的許多生命活動(dòng),在細(xì)胞中具有重要功能,主要在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、酶活性調(diào)節(jié)等過(guò)程中具有重要功能。
　　柞蠶是一種野生絹絲昆蟲(chóng),屬于鱗翅目、大蠶蛾科、柞蠶屬。除了作為紡織工業(yè)原料外,還有很高的藥用和食用等經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本研究利用分子生物學(xué)

2、和生物信息學(xué)方法對(duì)柞蠶14-3-3蛋白進(jìn)行研究,獲得的主要結(jié)果如下:
　　1、采用RT-PCR和RACE-PCR方法克隆獲得了該蛋白的全長(zhǎng)序列,14-3-3蛋白全長(zhǎng)1220bp,ORF為744bp,編碼247個(gè)氨基酸,分子量大小為28.1KDa和等電點(diǎn)為4.9。
　　2、采用RT-PCR法擴(kuò)增了柞蠶14-3-3蛋白的ORF,并連接至PET-28a(+)表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)菌株中,用IPTG進(jìn)行了不同濃度的