甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻蝦青素積累的影響及其分子機(jī)理的研究【開(kāi)題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開(kāi)題報(bào)告</b></p><p><b>　　生物技術(shù)</b></p><p>　　甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻蝦青素含量的影響及分子機(jī)理的研究</p><p>　　一、選題的背景與意義</p&

2、gt;<p>　　雨生紅球藻（Haematococcus pluvialis）是一種淡水單細(xì)胞綠藻，隸屬于綠藻門(mén)、團(tuán)藻目、紅球藻科、紅球藻屬，由于能積累一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的藥用次生代謝產(chǎn)物蝦青素，近年來(lái)已成為國(guó)際上藻類(lèi)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。在天然蝦青素生產(chǎn)來(lái)源（甲殼動(dòng)物的殼、酵母菌、微藻類(lèi)）中，雨生紅球藻中蝦青素的含量最高(2％)，大量研究表明雨生紅球藻對(duì)蝦青素的積累速率和生產(chǎn)總量較其它綠藻高，是蝦青素生產(chǎn)的主要原料。而且雨生紅

3、球藻所含蝦青素及其酯類(lèi)的配比(約70％的單酯，25％的雙酯及5％的單體)與水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物自身配比極為相似，此外，雨生紅球藻中蝦青素的結(jié)構(gòu)以3S一3 ’S型為主，與鮭魚(yú)等水產(chǎn)生物體內(nèi)蝦青素結(jié)構(gòu)基本一致，其工廠化生產(chǎn)和優(yōu)良品系的培育已引起人們廣泛關(guān)注。</p><p>　　蝦青素（Astaxanthin）是一種紅色的天然類(lèi)胡蘿卜素，是一種優(yōu)質(zhì)、高效、安全的著色劑和天然抗氧化劑，能提高動(dòng)物的免疫力和存活率，增加動(dòng)物產(chǎn)品的

4、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和色澤外觀。蝦青素具有清除氧自由基的強(qiáng)大能力，其抗氧化活性是類(lèi)胡蘿卜素的10倍、維生素E的550倍，被譽(yù)為“超級(jí)維生素E”。人工合成的蝦青素價(jià)格昂貴（每公斤3000美元），其著色能力和抗氧化能力較天然蝦青素低，而且動(dòng)物體對(duì)化學(xué)合成的蝦青素的吸收能力較弱，人工合成蝦青素過(guò)程中含非天然的異構(gòu)體和有害物質(zhì)污染，因此人們對(duì)天然蝦青素的興趣較高。天然蝦青素對(duì)人體絕對(duì)安全，目前主要作為人類(lèi)的高級(jí)保健食品、家畜的飼料添加劑。目前僅鮭魚(yú)飼料一項(xiàng)

5、的年市場(chǎng)容量就超過(guò)1.85億美元，并以每年8%的速率遞增；畜禽飼料添加劑的年市場(chǎng)容量也有1.25億美元，作為食品添加劑更顯示出極大的市場(chǎng)潛力。</p><p>　　甲基茉莉酸能夠在植物的抗逆反應(yīng)中誘導(dǎo)植物抗毒素的產(chǎn)生，在細(xì)胞工程中是促進(jìn)次生代謝產(chǎn)物積累的重要誘導(dǎo)因子。前人研究表明，甲基茉莉酸可誘導(dǎo)紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、銀杏內(nèi)酯和類(lèi)胡蘿卜素等次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生和積累。但目前甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻細(xì)胞生長(zhǎng)和蝦青素積累的影

6、響還未見(jiàn)報(bào)道。</p><p>　　在蝦青素生物合成中，1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(1-Deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase，DXS)催化丙酮酸和G3P縮合生成1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸，是新近發(fā)現(xiàn)的DXP（1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate）途徑的第一個(gè)酶，也是第一個(gè)限速酶，是蝦青素代謝工程的最重要靶點(diǎn)。在番茄果實(shí)成熟過(guò)程中，DXS的

7、表達(dá)量與類(lèi)胡蘿卜素的積累具有很高的一致性。在胡椒DXS的研究中表明，當(dāng)chloroplast(葉綠體)向chromoplast(成色素細(xì)胞)轉(zhuǎn)變過(guò)程中，DXS表現(xiàn)出超量表達(dá)，這是因?yàn)樾枰嗟腎PP參與類(lèi)胡蘿卜素的生物合成?？梢钥闯觯珼XS是蝦青素等類(lèi)胡蘿卜素合成和積累的關(guān)鍵基因。</p><p>　　針對(duì)雨生紅球藻蝦青素在應(yīng)用上的巨大潛力，通過(guò)研究甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻細(xì)胞生長(zhǎng)和蝦青素含量的影響，尋找適合蝦青素

8、積累的最佳誘導(dǎo)子及其酸濃度，為蝦青素的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)基礎(chǔ)。通過(guò)研究甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻蝦青素合成關(guān)鍵酶基因DXS表達(dá)的影響，確定DXS基因表達(dá)與蝦青素積累的關(guān)系，從而在分子水平上闡明雨生紅球藻蝦青素積累的原因和機(jī)理。</p><p>　　本項(xiàng)目試圖為進(jìn)一步提高雨生紅球藻的培養(yǎng)產(chǎn)量和蝦青素含量提供新的技術(shù)支持。通過(guò)在不同甲基茉莉酸的濃度梯度下蝦青素的含量的測(cè)定，找出具有最大生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)的生產(chǎn)蝦青素的方法，并進(jìn)行推

9、廣，在今后生產(chǎn)應(yīng)用上逐漸取代人工合成的蝦青素，提高生物吸收效果和其生物利用的安全性。同時(shí)它的完成，將為研究蝦青素基因的表達(dá)、信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)控提供新的實(shí)驗(yàn)途徑和模型。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問(wèn)題：</p><p>　?。ㄒ唬┭芯康幕緝?nèi)容：</p><p>　　1、甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻的生長(zhǎng)及蝦青素含量的影響；</p>&l

10、t;p>　　2、雨生紅球藻RNA的提??；</p><p>　　3、甲基茉莉酸誘導(dǎo)下雨生紅球藻DXS基因的表達(dá)；</p><p>　　4、比較DXS基因表達(dá)與蝦青素含量積累的關(guān)系。</p><p>　　二）擬解決的主要問(wèn)題：</p><p>　　1、雨生紅球藻RNA提取方法的優(yōu)化；</p><p>　　2、建立雨生

11、紅球藻蝦青素含量的測(cè)定方法。</p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線(xiàn)：</p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2009.9-2009.12</p><p>　　1）研究甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；</p><p>　　2）雨生紅球藻RNA提取；</p><

12、;p>　　2010.3-2010.6</p><p>　　1）究甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻蝦青素積累的影響；</p><p>　　2）dxs基因核心片段的克?。?lt;/p><p>　　2010.7-2010.9</p><p>　　1）研究甲基茉莉酸處理下dxs基因的表達(dá)；</p><p>　　2）研究dxs基因表達(dá)與

13、蝦青素積累之間的相關(guān)性；</p><p>　　2010.10-2010.12 </p><p>　　1）探討蝦青素積累分子機(jī)理；</p><p>　　2011.1-2011.3</p><p>　　1) 撰寫(xiě)畢業(yè)論文。</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p>

14、<p>　　[1] Richmond A. Handbook of microalgal culture: biotechnology and applied phycology[M]. Iowa, USA: Blackwell Science Ltd, 2004: 281-288.</p><p>　　[2] Shibata A, Kiba Y, Alati N, et al. Molecular c

15、haracteristics of astaxanthin and beta-carotene in the phospholipids, monolayer and their distributions in the phospholipids bilayer[J]. Chemistry Physics Lipids, 2001, (11): 11-22.</p><p>　　[3] 殷明炎, 劉建國(guó), 張京

16、浦, 等. 雨生紅球藻和蝦青素研究述評(píng)[J]. 海洋湖沼通報(bào), 1998, (2): 53-62.</p><p>　　[4] 魏東, 藏曉南. 大規(guī)模培養(yǎng)雨生紅球藻生產(chǎn)天然蝦青素的研究進(jìn)展和產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀[J]. 中國(guó)海洋藥物, 2001, (5): 4-8.</p><p>　　[5] Gundlach H, Muller M J, Kutchan T M, et al. Jasmonic

17、 acid is a signal transducer in elicitor-induced plant cell cultures[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89: 2389-2392.</p><p>　　[6] Gong Y F, Liao Z H, Chen M, et al. Molecular cloning and expression profile

18、analysis of Ginkgo biloba DXS gene encoding 1-Deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase, the first committed enzyme of the 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate pathway[J]. Planta Medica, 2006, (72): 329-335.</p><p&

19、gt;　　[7] Kang S M, Min J Y, Kim Y D, et al. Effects of methyl jasmonate and salicylic acid on the production of bilobalide and ginkgolides in cell cultures of Ginkgo biloba[J]. In Vitro Cell Dev Biol Plant, 2006, 42 (1):

20、 44-49.</p><p>　　[8] 余龍江, 朱敏, 劉幸福, 等. MeJA對(duì)中國(guó)紅豆杉胚性細(xì)胞紫杉醇生物合成的影響[J]. 武漢植物學(xué)研究, 1999, 17(4): 371-374.</p><p>　　[9] 朱穎, 王麗麗, 柴蕓彬, 等. 茉莉酸甲酯對(duì)杜氏鹽藻β-胡蘿卜素含量的影響. 寧波大學(xué)學(xué)報(bào), 2010，23(1): 13-17.</p><p

21、>　　[10] 陳興才, 黃偉光, 歐陽(yáng)琴. 雨生紅球藻的培養(yǎng)及蝦青素累積條件的探討[J]. 福州大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2005, 33(2): 259-263.</p><p>　　[11] 苗鳳萍, 李夜光, 耿亞紅. 溫度對(duì)雨生紅球藻(Haematococcus pluvialis) 生物量和蝦青素產(chǎn)量的影響[J]. 武漢植物學(xué)研究, 2005, 23(1): 73-76.</p>

22、<p>　　[12] 蔣霞敏, 柳敏海, 任凱來(lái). 化學(xué)因子對(duì)雨生紅球藻誘變株蝦青素積累的調(diào)控[J]. 寧波大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版), 2005, 18(3): 306-312.</p><p>　　[13] 董慶霖, 趙學(xué)明, 邢向英, 等. 碳和氮代謝被抑制誘導(dǎo)雨生紅球藻細(xì)胞內(nèi)蝦青素的合[J]. 化學(xué)工程, 2006, 34(12): 46-48, 57.</p><p>　　[1

23、4] Liao ZH, Chen M, Gong YF, et al. Isoprenoid biosynthesis in plants: pathways, gene, regulation and metabolic engineering[J]. J Biol Sci, 2006, 6(1): 209-219.</p><p>　　[15] Rohmer M. The discovery of a mev

24、alonate-independent pathway for isoprenoid biosynthesis in bacteria, algae and higher plants[J]. Nat Prod Rep, 1999,16: 565-574.</p><p>　　[16] Bouvier F, d'Harlingue A, Suire C, et al. Dedicated roles of

25、 plastid transketolases during the early onset of isoprenoid biosynthesis in peper fruits[J]. Plant physiol, 1998, 117: 1423-1431.</p><p>　　[17] Chahed K, Oudin A, Guivarc'h N, et al. 1-deoxy-D-xylulose

26、5-phosphate synthase from periwinkle: cDNA identification and induced gene expression in terpenoid indole alkaloid producing cells[J]. Plant Physiol Bbiochem, 2000, 38: 559-566.</p><p>　　[18] Lois L M, Rodr&

27、#237;guez-Concepción M, Gallego, et al. Carotenoid biosynthesis during tomato fruit development: Regulatory role of 1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase[J]. Plant J, 2000, 22(6): 503-513.</p><p>　　[1

28、9] 王麗麗、龔一富. 雨生紅球藻蝦青素合成關(guān)鍵酶基因DXS的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 廣東省研究生學(xué)術(shù)論壇論文集, 2008, 144-151.</p><p>　　[20] 陳曉飛, 嚴(yán)小軍. 紅球藻蝦青素含量測(cè)定方法的探討[J]. 寧波大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版), 2007, 20(4): 441-445.</p><p>　　[21] 袁志發(fā), 周靜芋. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析[M]. 高等教

29、育出版社, 2000: 172-88.</p><p>　　[22] Mueller M J, Brodschelm W, Spannagl E. Signaling in the elicitation process is mediated through the octadecanoid pathway leading to jasmonic acid[J]. Proc Natl Acad Sci USA,

30、 1993, 90: 7490-7494.</p><p>　　[23] Tamogami S, Rakwal R, Kodam O. Phytoalexin production elicited by exogenously applied jasmonic acid in rice leaves (Oryza sativa L) is under the control of cytokinins and

31、ascorbic acid[J]. FEBS Lett, 1997, 412: 61-64.</p><p>　　[24] 桂連友, 劉樹(shù)生, 陳宗懋. 外源茉莉酸和MeJA誘導(dǎo)植物抗蟲(chóng)作用及其機(jī)理[J]. 昆蟲(chóng)學(xué)報(bào), 2004, 47(4): 507-514.</p><p>　　[25] 楊英, 鄭輝, 何峰. 不同濃度茉莉酸甲酯對(duì)懸浮培養(yǎng)的脹果甘草細(xì)胞合成甘草總黃酮的影響[J]. 云

32、南植物研究, 2008, 30(5): 586-592.</p><p>　　[26] 王學(xué)勇, 崔光紅, 黃璐琦, 等. 誘導(dǎo)子對(duì)丹參毛狀根中丹參酮類(lèi)成分積累影響[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2007, 32(10): 976-979.</p><p>　　[27] Kobayashi M, Sakamoto Y. Singlet oxygen quenching ability of as

33、taxanthin esters from the green alga Haematococcus pluvialis [J]. Biotechnol Lett, 1999, 21: 265-269.</p><p>　　[28] 金蓉, 朱長(zhǎng)青, 徐昌杰. 1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶（DXS）及其編碼基因[J]. 細(xì)胞生物學(xué)雜志, 2007, 29: 706-712.</p><p&g

34、t;<b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b>　　生物技術(shù)</b></p><p>　　誘導(dǎo)子對(duì)雨生紅球藻蝦青素含量的影響及其分子機(jī)理的研究進(jìn)展</p><p>　　摘要：蝦青素是雨生紅球藻細(xì)胞內(nèi)的一種次生代謝產(chǎn)物，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本文主要介紹了雨生紅球藻、蝦青素的生物學(xué)功能以及蝦青素在雨生紅球藻內(nèi)

35、積累的分子機(jī)理。介紹三種不同誘導(dǎo)子對(duì)次生代謝產(chǎn)物的積累的影響。</p><p>　　關(guān)鍵詞：雨生紅球藻；蝦青素；誘導(dǎo)子</p><p><b>　　前言</b></p><p>　　雨生紅球藻(Haematococcus pluvialis)是一種單細(xì)胞綠藻，屬綠藻門(mén)、團(tuán)藻目、紅球藻科、紅球藻屬，能生產(chǎn)一種紅色的天然類(lèi)胡蘿卜素—蝦青素（Asta

36、xanthin）。蝦青素是一種優(yōu)質(zhì)、高效、安全的著色劑和天然抗氧化劑，能提高動(dòng)物的免疫力和存活率，增加動(dòng)物產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和色澤外觀[1, 2]。對(duì)人體絕對(duì)安全，不僅可以用作水產(chǎn)養(yǎng)殖的飼料添加劑、人的食品添加劑，在藥品、化妝品和高級(jí)營(yíng)養(yǎng)保健品等領(lǐng)域也有非常大的應(yīng)用潛力[3, 4]。目前國(guó)際市場(chǎng)供貨能力有限，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足需求，僅合成品價(jià)格就高于3000美元/Kg，因此，采用各種途徑提高雨生紅球藻蝦青素含量一直是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。</p

37、><p>　　雨生紅球藻( Haematococcus pluvialis) 是一種淡水單細(xì)胞綠藻，在分類(lèi)學(xué)上屬于綠藻門(mén)(Chlorophata) 、綠藻綱(Chlorophyceae) 、團(tuán)藻目(Volvocales) 、紅球藻科( Haematococcaceae) 、紅球藻屬( Haematococcus) 。細(xì)胞為廣卵形到廣橢圓形，寬19~51μm，長(zhǎng)28~63μm，其大小與細(xì)胞階段有關(guān)。與其他綠藻細(xì)胞一樣具

38、有色素體和蛋白核，光和色素成分包括葉綠素a、葉綠素b、葉黃素和類(lèi)胡蘿卜素。</p><p>　　雨生紅球藻具有特殊的生物學(xué)性質(zhì)，其生活周期中主要有兩種細(xì)胞類(lèi)型，即進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的綠色游動(dòng)細(xì)胞和累積蝦青素的紅色不動(dòng)孢子。在有利的生長(zhǎng)條件下，它以綠色的游動(dòng)細(xì)胞存在，具有2條頂生、等長(zhǎng)、約等于體長(zhǎng)的鞭毛；而在不利的環(huán)境下，細(xì)胞生長(zhǎng)趨于緩慢，由游動(dòng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為不動(dòng)孢子，同時(shí)大量累積蝦青素而使細(xì)胞呈現(xiàn)出紅色[5]。它是自然界中

39、天然蝦青素含量最高的生物，蝦青素的積累量可高達(dá)細(xì)胞干重的4%，是其他生物蝦青素合成積累量的一到幾個(gè)數(shù)量級(jí)。</p><p>　　蝦青素 </p><p>　　蝦青素屬于四萜衍生物，在細(xì)胞質(zhì)體中合成，在質(zhì)體中，新近研究證實(shí)了一條獨(dú)立于細(xì)胞質(zhì)甲羥戊酸(MVA)途徑的萜類(lèi)合成的新途徑，即2-C-甲基-D-赤藻糖醇-4-磷酸（MEP）途徑，植物中單萜、二萜和少數(shù)倍半萜都由這條

40、途徑合成。1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(1-Deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase，DXS)是MEP途徑的第一個(gè)酶，也是第一個(gè)關(guān)鍵酶[6]。超量表達(dá)dxs基因可提高単萜化合物、類(lèi)胡蘿卜素、萜類(lèi)化合物和萜類(lèi)吲哚生物堿的含量[7-9]。目前，王麗麗等采用首次從雨生紅球藻中克隆了dxs基因核心片段[10]，但MeJA對(duì)雨生紅球藻蝦青素合成基因dxs表達(dá)的影響還未見(jiàn)報(bào)道。</p><

41、;p><b>　　蝦青素的生物學(xué)功能</b></p><p><b>　　抗氧化作用</b></p><p>　　蝦青素的分子結(jié)構(gòu)具有比較活潑的電子效應(yīng)，能向自由基提供電子或吸引自由基的未配對(duì)電子，通過(guò)吸收自由基多余的能量到分子鏈中，導(dǎo)致分子降解，阻止其它分子或組織受破壞，同時(shí)還可阻止富含脂質(zhì)的膜迅速降解?？梢?jiàn)，蝦青素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)使其極易與自

42、由基發(fā)生反應(yīng)而清除自由基，從而起到抗氧化作用。[12-13]</p><p>　　Lee等[14]比較了共軛雙鍵數(shù)不同的葉黃素、玉米黃質(zhì)、番茄紅素、異玉米黃素和蝦青素5種類(lèi)胡蘿卜素及其衍生物在豆油光氧化作用中淬滅活性氧的作用，發(fā)現(xiàn)此作用隨共軛雙鍵的增加而增加，并以蝦青素的作用為最強(qiáng)。Miki[15]以含亞鐵離子的血紅素蛋白作為自由基產(chǎn)生者，亞油酸為接受者，用硫代巴比妥酸法檢測(cè)各受試類(lèi)胡蘿卜素、維生素E等的抗氧化性

43、，結(jié)果表明：蝦青素抗脂肪氧化能力最強(qiáng)，比β-胡蘿卜素高10倍，比維生素E高100倍，故又稱(chēng)“超級(jí)維生素E”。蝦青素還可解除光誘導(dǎo)產(chǎn)生的氧化脅迫，可保護(hù)機(jī)體免受UVA等帶來(lái)的傷害[16-17]。</p><p><b>　　增強(qiáng)機(jī)體免疫力</b></p><p>　　此外，蝦青素能顯著提高動(dòng)物的免疫能力。小鼠活體實(shí)驗(yàn)表明，與葉黃素和類(lèi)胡蘿卜素比較，蝦青素能顯著促進(jìn)小鼠在

44、胸腺依賴(lài)抗原（TD-Ag）刺激時(shí)產(chǎn)生IgM和IgG。此外，蝦青素增強(qiáng)小鼠釋放白細(xì)胞介素-I和腫瘤壞死因子α的作用比β-胡蘿卜素和角黃質(zhì)強(qiáng)得多。有抗原存在時(shí)，蝦青素也能顯著促進(jìn)脾細(xì)胞產(chǎn)生抗體，增強(qiáng)T細(xì)胞刺激下人體內(nèi)白細(xì)胞免疫球蛋白的產(chǎn)生[18-19]。裴凌鵬[20]利用小鼠移植性腫瘤實(shí)驗(yàn)觀察蝦青素對(duì)其體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和免疫器官胸腺、脾臟的影響,并通過(guò)ANAE法檢測(cè)蝦青素對(duì)T細(xì)胞陽(yáng)性率的影響。結(jié)果表明，蝦青素對(duì)S180肉瘤生長(zhǎng)有一定抑制作用

45、,各劑量組均可以提高免疫器官臟器指數(shù),與模型組比具有顯著性差異( P < 0. 01)；能夠提高S180荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，可見(jiàn)蝦青素具有抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能的作用。</p><p><b>　　抗癌作用</b></p><p>　　Nishino[21]研究了天然類(lèi)胡蘿卜素的抗癌作用，發(fā)現(xiàn)蝦青素具有很強(qiáng)的抗癌作用。Tanaka等[22]研究了蝦青素對(duì)由

46、一種亞硝胺所引起的雄性ICR老鼠的膀胱癌和由一種硝基喹啉氧化物所引起的雄性F344老鼠的口腔癌的化學(xué)預(yù)防作用后發(fā)現(xiàn)，對(duì)于膀胱癌和口腔癌的發(fā)生，蝦青素是一種潛在的化學(xué)預(yù)防劑，并提出蝦青素的這種作用可能是由于對(duì)細(xì)胞繁殖的抑制作用所引起的。</p><p><b>　　著色作用</b></p><p>　　大量試驗(yàn)表明，在水產(chǎn)動(dòng)物餌料中添加適量的著色劑可改善其皮膚和肌肉的顏

47、色，提高觀賞魚(yú)類(lèi)的觀賞性，提高商品魚(yú)、蝦等的商品價(jià)值。早在1980年，Johnson等[23]就將紅法夫酵母加入鮭魚(yú)、鱒魚(yú)、鱘魚(yú)的飼料中，使它們的體色變得鮮艷。Yamada[24]比較了β-胡蘿卜素、角黃素和蝦青素等3種類(lèi)胡蘿卜素對(duì)對(duì)蝦的著色效果，結(jié)果表明同樣以100×10-6(m/m) 濃度飼料添加量喂食對(duì)蝦,蝦青素在其組織中積累量最高，分別比角黃素和β-胡蘿卜素高23 %和43 %；若蝦青素使用量增至200×10

48、-6(m/m)，則組織中含量最高可達(dá)29.1×10-6(m/m)，證明蝦青素是著色效果最好的類(lèi)胡蘿卜素。另外，蝦青素作為一種著色劑加到禽畜飼料中，可使蛋雞的顏色加深、營(yíng)養(yǎng)提高，從而增強(qiáng)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。</p><p>　　蝦青素積累的分子機(jī)制</p><p>　　雨生紅球藻主要是在高光、高溫、氮缺乏和異養(yǎng)等逆境下積累蝦青素的。在較長(zhǎng)時(shí)間的逆境脅迫下，紅球藻細(xì)胞主要是通過(guò)上述與蝦青素合

49、成相關(guān)酶基因的轉(zhuǎn)錄水平的提高和激活一些相關(guān)酶類(lèi)來(lái)促進(jìn)蝦青素的合成的。[25-26]</p><p>　　Steinbrenner和Linden[25]研究發(fā)現(xiàn)，在中光照的條件下，伴隨著蝦青素在細(xì)胞中的積累，與蝦青素合成相關(guān)的的基因，包括psy、pds、lcyb和crtR-B的轉(zhuǎn)錄水平都大大提高了；在光照12~24h，mRNA水平達(dá)到最高，然后逐漸降低。說(shuō)明酶蛋白含量的提高是由于酶基因轉(zhuǎn)錄水平提高的結(jié)果。除了蝦青素

50、合成相關(guān)酶基因的轉(zhuǎn)錄水平提高外，bkt在強(qiáng)光脅迫下，mRNA的含量并沒(méi)有提高，但細(xì)胞中酶蛋白的含量卻隨著光強(qiáng)度的升高而升高。Grunewald等[27]的實(shí)驗(yàn)中也觀察到，在脅迫條件下蝦青素合成酶基因pds和crtO的基因轉(zhuǎn)錄水平均上調(diào)。在施加強(qiáng)光和氮缺失的誘導(dǎo)條件后1.5 d，crtO mRNA的含量在單個(gè)細(xì)胞中持續(xù)上升，4 d 后達(dá)到最高水平；與此同時(shí),細(xì)胞內(nèi)類(lèi)胡蘿卜素的含量也在同步上升。在誘導(dǎo)條件下,pds的mRNA轉(zhuǎn)錄量也呈線(xiàn)性上

51、升，4 d后達(dá)到最大值,隨后緩慢下降。這說(shuō)明,脅迫條件下,蝦青素的合成也是受pds和crtO酶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的。用脫落酸(ABA)和氮饑餓加高光誘導(dǎo)雨生紅球藻，研究在脅迫條件下蝦青素在細(xì)胞內(nèi)積累的變化以及蝦青素合成基因的表達(dá)模式。半定量RT-PCR</p><p>　　由此可見(jiàn)，雨生紅球藻細(xì)胞中蝦青素的積累主要是由于相關(guān)酶基因轉(zhuǎn)錄水平提高和蛋白含量增加的結(jié)果。對(duì)于脅迫條件如何促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄的，Steinbrenne

52、r和Linden[25]通過(guò)不同的電子傳遞鏈抑制劑的作用發(fā)現(xiàn)lcyb以及psy、pds和crtZ在環(huán)境脅迫下的上調(diào)表達(dá)受細(xì)胞光合氧化還原狀態(tài)控制，信號(hào)物質(zhì)為電子傳遞鏈中的質(zhì)體醌。</p><p><b>　　誘導(dǎo)子</b></p><p>　　在植物組織培養(yǎng)中，誘導(dǎo)子能誘導(dǎo)生物堿、萜類(lèi)、皂苷、黃酮類(lèi)化合物、酚類(lèi)、香豆素等多種次生代謝產(chǎn)物的合成及其產(chǎn)量的提高。它們能作為

53、一種特定的生化信號(hào)，快速、專(zhuān)一和有選擇地誘導(dǎo)特定基因的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)植物細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的合成，這為研究植物次生代謝調(diào)控提供了新思路。利用誘導(dǎo)子處理植物組織培養(yǎng)物以提高次生代謝產(chǎn)物的含量已成為人們普遍重視的新方法。</p><p><b>　　誘導(dǎo)子的作用機(jī)理</b></p><p>　　誘導(dǎo)子引起了植物代謝過(guò)程的一系列變化,最終使植物產(chǎn)生防衛(wèi)反應(yīng),如積累植保素。實(shí)質(zhì)

54、上這是一個(gè)連續(xù)的、信號(hào)逐級(jí)傳導(dǎo)的過(guò)程。而每次傳導(dǎo)都可產(chǎn)生相應(yīng)的生化反應(yīng)，從而發(fā)揮相應(yīng)的生理功能，完成特定的生物學(xué)效應(yīng)。誘導(dǎo)子作為外界信號(hào)要被細(xì)胞識(shí)別，首先是通過(guò)誘導(dǎo)子與細(xì)胞膜上受體的結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這一過(guò)程會(huì)引起膜成分的變化以致引起膜的通透性、膜內(nèi)離子分布的變化。誘導(dǎo)子作為外界信號(hào)作用胞質(zhì)膜而引起膜上發(fā)生變化，到引起胞內(nèi)基因啟動(dòng)、酶活性改變的過(guò)程應(yīng)該是一個(gè)級(jí)聯(lián)過(guò)程，這中間需要有物質(zhì)充當(dāng)胞內(nèi)信使，也即第二信使，目前人們由實(shí)驗(yàn)推出的主要第二信

55、使包括Ca2+、cAMP、磷酸肌醇、G-蛋白、SA、茉莉酸及其甲酯以及植物細(xì)胞壁組成成分等。誘導(dǎo)子信號(hào)被傳遞到細(xì)胞內(nèi)以后，通過(guò)控制次生代謝途徑中關(guān)鍵酶的合成來(lái)調(diào)節(jié)次生代謝產(chǎn)物的合成。誘導(dǎo)作用是在轉(zhuǎn)錄水平上進(jìn)行的，另外，誘導(dǎo)物可以活化植物次生代謝途徑并對(duì)特定代謝產(chǎn)物進(jìn)行選擇性誘導(dǎo)。[28]</p><p>　　誘導(dǎo)子的作用效果與誘導(dǎo)子濃度、誘導(dǎo)子加入時(shí)間以及誘導(dǎo)的時(shí)間長(zhǎng)短等多種因素密切相關(guān)。在誘導(dǎo)子應(yīng)用的過(guò)程中，對(duì)

56、于誘導(dǎo)子的用量、加入時(shí)間及加入后何時(shí)次生代謝產(chǎn)物合成量最高等問(wèn)題，人們也做了大量的實(shí)驗(yàn)加以研究，施中東等[29]利用短期誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)考察了幾種誘導(dǎo)子的最優(yōu)誘導(dǎo)濃度，結(jié)果表明，在南方紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)體系中分別加入1.0 mmol/ L 硝酸鈰銨、0.01 mmol/ L 硝酸銀、0.1 mg/ L 花生四烯酸、0.1 mg/ L 水楊酸以及10.0 mg/ L甲基茉莉酮酸最有利于紫杉醇產(chǎn)量的提高。有些誘導(dǎo)子中既含有誘導(dǎo)子活性成分，又含拮抗成分，

57、兩者的作用相互制約，所以誘導(dǎo)物的用量必須考慮讓二者的作用達(dá)到平衡。在最適時(shí)間加入最適量的誘導(dǎo)子，并不能保證最后得到最多的次生代謝產(chǎn)物。因?yàn)榧尤胝T導(dǎo)子后，次生代謝產(chǎn)物合成量開(kāi)始提高，但一定時(shí)間以后，有些植物培養(yǎng)體系合成的次生代謝產(chǎn)物量反而下降。產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因可能有以下幾種：一是合成的大量次生代謝物反饋抑制了該合成途徑的酶，使合成受阻，這種抑制作用在一般的生物合成過(guò)程中都存在。二是次生代謝物與誘導(dǎo)物競(jìng)爭(zhēng)與植物細(xì)胞的結(jié)合位點(diǎn)，使誘導(dǎo)信號(hào)不

58、被識(shí)別，誘導(dǎo)物</p><p>　　誘導(dǎo)子對(duì)次生代謝產(chǎn)物積累的影響</p><p>　　目前，誘導(dǎo)子被廣泛地應(yīng)用于次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。在植物組織培養(yǎng)中，它們能誘導(dǎo)生物堿，萜類(lèi)、皂苷、黃酮類(lèi)化合物、酚類(lèi)、香豆素等多種次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。因此，誘導(dǎo)子在天然藥物成分生產(chǎn)方面有著非常廣闊的應(yīng)用前景。</p><p>　　MeJA對(duì)次生代謝產(chǎn)物含量的影響</p>

59、<p>　　甲基茉莉酸(methyl jasmonate, MeJA）是亞麻酸衍生的具有環(huán)戊酮基團(tuán)的化合物。最初，MeJA是從一種真菌中分離到的，隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)它廣泛存在于植物界中。早期人們主要通過(guò)外源施加MeJA來(lái)研究它的主要生理功能，隨著20世紀(jì)80年代分子生物學(xué)的興起，人們對(duì)它的生物合成和代謝的分子調(diào)控機(jī)理作了詳盡的研究，發(fā)現(xiàn)茉莉酸調(diào)控許多基因的表達(dá)。歸納起來(lái)有兩方面：一部分基因與植物發(fā)育有關(guān)，如：種子的萌發(fā)和生

60、長(zhǎng)、貯藏蛋白的積累、花和果實(shí)的發(fā)育、花粉的育性；另一部分基因與自身防御系統(tǒng)有關(guān)，表現(xiàn)在對(duì)真菌感染病蟲(chóng)害、干旱機(jī)械損傷以及滲透脅迫等逆境的應(yīng)激。</p><p>　　目前，MeJA被認(rèn)為是高等植物體內(nèi)的內(nèi)源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，具有廣泛的生理功能，在植物次生代謝過(guò)程中起誘導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)作用。更為重要的是，它們是病原物、激發(fā)子及創(chuàng)傷誘導(dǎo)植物防衛(wèi)基因表達(dá)的信號(hào)分子，并且其本身也可作為激發(fā)子。近期的許多工作集中在外源MeJA誘導(dǎo)植物

61、防衛(wèi)反應(yīng)及其信號(hào)傳遞作用。MeJA不僅促進(jìn)細(xì)胞由初生代謝提前向次生代謝轉(zhuǎn)化，并且能夠增強(qiáng)細(xì)胞的次生代謝，有利于細(xì)胞相關(guān)次生代謝產(chǎn)物的合成。[30]</p><p>　　外源性茉莉酸類(lèi)化合物能有效刺激植物次生代謝物的生物合成，可引起植物次生代謝產(chǎn)物的迅速積累，其作用具有廣泛性，能誘導(dǎo)包括萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)等化合物的積累。Gong等人[31]的研究表明MeJA能有效調(diào)控銀杏細(xì)胞中銀杏內(nèi)酯的合成，提高銀杏內(nèi)酯的含量

62、。應(yīng)用外源MeJA處理煙草(Nicotiana spp.)可誘導(dǎo)煙草從頭合成煙堿，使整株煙草的煙堿含量提高2-10倍。余龍江等[32]研究的MeJA對(duì)紅豆杉胚性細(xì)胞紫杉醇生物合成的影響實(shí)驗(yàn)表明，在第10 d、20 d加入MeJA，均在100 μmol/L處出現(xiàn)最大值，分別使紫杉醇產(chǎn)量提高了140.2%和137.7%。王保軍等[33]研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中添加100μmol/L MeJA后, 貫葉連翹(Hypericum perforatum

63、 L. )懸浮細(xì)胞中的貫葉金絲桃素(hyperforin, HF)的產(chǎn)量分別是未經(jīng)MeJA處理的1.73 倍；培養(yǎng)3 d時(shí), 培養(yǎng)基中添加100μmol·L-1 MeJA能提高HF產(chǎn)量， 是未經(jīng)MeJA處理的2.4倍。楊英等[34]以脹果甘草(Glycyrrhiza inflataBat.)懸浮細(xì)胞為材料，在對(duì)</p><p>　　AA對(duì)次生代謝產(chǎn)物含量的影響</p><p>　

64、　花生四烯酸（Arachidonic acid，AA），學(xué)名為5，8，11，14-全順-二十碳四烯酸，是ω-6系列的一種重要的多不飽和脂肪酸。AA除作為具有廣泛生物活性物質(zhì)類(lèi)花生酸前體外，其本身還是一個(gè)十分重要的細(xì)胞內(nèi)第二信使，直接參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或者影響其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以調(diào)控細(xì)胞的生物活動(dòng)。</p><p>　　研究表明用AA處理土豆塊莖可促進(jìn)其茄尼醇含量的積累。龔一富等在銀杏(Ginkgo biloba)中

65、的研究表明，AA可調(diào)控DXS基因的表達(dá)水平，促進(jìn)銀杏內(nèi)酯的積累。Srinivasan等[37]用5 μg/g AA處理紅豆杉（Taxus chinensis）15 d后，使紫杉醇含量提高了9.3倍。苗志奇等(2000)利用短期誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，分析了AA對(duì)紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)中紫杉烷合成的影響，在適宜濃度的AA誘導(dǎo)下，紫杉醇（taxol）的產(chǎn)量提高了近3倍。孫彬賢等[38]以南方紅豆杉（Taxus chinensisvar. meirei）懸浮細(xì)胞為

66、材料研究了AA對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和紫杉醇含量的影響，結(jié)果表明加入3.2 μmol/L AA使紫杉醇含量提高了1倍。</p><p>　　CAS對(duì)次生代謝產(chǎn)物含量的影響</p><p>　　硫酸鈰銨（Cerium(IV) ammonium sulfate，CAS）是稀土化合物的一種。有人指出，在誘導(dǎo)培養(yǎng)中，稀土離子不能進(jìn)入細(xì)胞，而是聚集在植物細(xì)胞壁和膜外的外側(cè)之間(周世恭, 1995; 張若樺,

67、 1987)，因此稀土可能作為一種外界信號(hào)作用于胞質(zhì)膜而在膜上發(fā)生變化，引起胞內(nèi)基因啟動(dòng)，酶活性的改變，從而啟動(dòng)細(xì)胞的防御機(jī)制。由于稀土離子可以改變細(xì)胞膜通透性，從而使次生代謝產(chǎn)物迅速分泌到培養(yǎng)基中，是提高植物培養(yǎng)細(xì)胞中次生代謝產(chǎn)物含量的另一有效途徑。近年來(lái)，稀土元素被用于多種藥用植物細(xì)胞的培養(yǎng)，在促進(jìn)次生代謝產(chǎn)物合成方面效果顯著。</p><p>　　李景川等[39]研究了Ce4+對(duì)懸浮培養(yǎng)南方紅豆杉細(xì)胞可溶性

68、蛋白和紫杉醇合成的動(dòng)態(tài)影響，結(jié)果表明適宜濃度Ce4+（100 mmol/L）在短期內(nèi)可大幅度提高紫杉醇的合成速度，達(dá)到最高積累。胡國(guó)武[40]研究表明,在東北紅豆杉(Taxus cuspidata)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)加入硝酸鈰銨能有效地提高紫杉烯合成酶基因轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)紫杉醇合成。崔堂兵等[41]發(fā)現(xiàn)，l mg/L 的硝酸鈰銨及10 mg/L 的硝酸鑭均能促進(jìn)銀杏萜內(nèi)酯的積累。Yuan等[42]發(fā)現(xiàn)ce3+、La3+ 及混合稀土在合適的濃度范圍

69、內(nèi)可促進(jìn)水母雪蓮(Saussurea medusa)細(xì)胞黃酮類(lèi)化合物的合成，其中以0.025 mmo1/L 的ce3+效果最佳，黃酮類(lèi)化合物產(chǎn)量是對(duì)照實(shí)驗(yàn)的166.7％。</p><p><b>　　展望</b></p><p>　　誘導(dǎo)子被廣泛地應(yīng)用于次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。在植物組織培養(yǎng)中，它們能誘導(dǎo)生物堿，萜類(lèi)、皂苷、黃酮類(lèi)化合物、酚類(lèi)、香豆素等多種次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)

70、生。而誘導(dǎo)因子MeJA、ARA、CAS對(duì)雨生紅球藻蝦青素積累的影響尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。針對(duì)雨生紅球藻蝦青素在應(yīng)用上的巨大潛力，研究誘導(dǎo)子對(duì)雨生紅球藻細(xì)胞生長(zhǎng)和蝦青素含量的影響，為雨生紅球藻蝦青素的規(guī)模化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。研究誘導(dǎo)子對(duì)蝦青素合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)的影響，為探明雨生紅球藻蝦青素積累的分子機(jī)制研究提供基礎(chǔ)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p&g

71、t;　　[1] Richmond A. Handbook of microalgal culture: biotechnology and applied phycology[M]. Iowa, USA: Blackwell Science Ltd, 2004: 281-288.</p><p>　　[2] Shibata A, Kiba Y, Alati N, et al. Molecular characte

72、ristics of astaxanthin and beta-carotene in the phospholipids, monolayer and their distributions in the phospholipids bilayer[J]. Chemistry Physics Lipids, 2001, (11): 11-22.</p><p>　　[3] 殷明炎, 劉建國(guó), 張京浦, 等. 雨

73、生紅球藻和蝦青素研究述評(píng)[J]. 海洋湖沼通報(bào), 1998, (2): 53-62.</p><p>　　[4] 魏東, 藏曉南. 大規(guī)模培養(yǎng)雨生紅球藻生產(chǎn)天然蝦青素的研究進(jìn)展和產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀[J]. 中國(guó)海洋藥物, 2001, (5): 4-8.</p><p>　　[5]沈建新, 韋金河. 利用雨生紅球藻生產(chǎn)蝦青素的研究進(jìn)展及其產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2007, 3: 196~

74、199.</p><p>　　[6] Rohmer M. The discovery of a mevalonate-independent pathway for isoprenoid biosynthesis in bacteria, algae and higher plants[J]. Nat Prod Rep, 1999,16: 565-574.</p><p>　　[7] Bo

75、uvier F, d'Harlingue A, Suire C, et al. Dedicated roles of plastid transketolases during the early onset of isoprenoid biosynthesis in peper fruits[J]. Plant physiol, 1998, 117: 1423-1431.</p><p>　　[8] C

76、hahed K, Oudin A, Guivarc'h N, et al. 1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase from periwinkle: cDNA identification and induced gene expression in terpenoid indole alkaloid producing cells[J]. Plant Physiol Bbiochem,

77、2000, 38: 559-566.</p><p>　　[9] Lois L M, Rodríguez-Concepción M, Gallego, et al. Carotenoid biosynthesis during tomato fruit development: Regulatory role of 1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase

78、[J]. Plant J, 2000, 22(6): 503-513.</p><p>　　[10] 王麗麗、龔一富. 雨生紅球藻蝦青素合成關(guān)鍵酶基因DXS的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 廣東省研究生學(xué)術(shù)論壇論文集, 2008, 144-151.</p><p>　　[11] 陳曉飛, 嚴(yán)小軍. 紅球藻蝦青素含量測(cè)定方法的探討[J]. 寧波大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版), 2007, 20(4): 4

79、41-445.</p><p>　　[12]陸開(kāi)形, 蔣霞敏, 翟興文. 蝦青素的生物學(xué)功能及應(yīng)用[J]. 寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版）, 2003, 16(1): 95~98.</p><p>　　[13]范榮新, 蝦青素的性質(zhì)與開(kāi)發(fā)[J]. 海湖鹽與化工, 2001, 29(6): 17~19.</p><p>　　[14]Lee S H, Min D B. Effe

80、cts of quenching mechanisms and kinetics of carotenoids in chlorophyll-sensitised photo-oxidation of soybeanoil [J]. J Agric Food Chem, 1990, 38(8): 1630~1634.</p><p>　　[15]Miki W, Hosoda K, Kondo K, et al.

81、Astaxanthin-containing drink [P]. Patent applicationt number 10155459 [P]. Japanese Patent: 10155459, 1998.</p><p>　　[16]Corona V, Aracri B, Kosturkova G, et al. Regulation of a carotenoid biosynthesis gene

82、promoter during plant development [J]. Plant J, 1996, 9(4): 505~512.</p><p>　　[17]Oshima S, Ojima F, Sakamoto H, et al. Inhibitory effect of beta-carotene and astaxanthin on photosensitized oxidation of phos

83、pholipids bilayers [J]. Nutr Sci Vitaminnol, 1993, 39(6): 607~615.</p><p>　　[18]李兆華, 劉鵬. 蝦青素的功能及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 食品與藥品, 2005, 7(9): 17~20.</p><p>　　[19]Jyonouchi H, Sun S, Mizokami M, et al. Effects of

84、various carotenoids on cloned, effector- stage T-helper cell activity [J]. Nutr Cancer, 1996, 26(3): 313~324.</p><p>　　[20]裴凌鵬. 蝦青素體內(nèi)抗腫瘤及其免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 上海中醫(yī)藥雜志, 2009, 43(6): 68~69.</p><p>　　[2

85、1]Nishino H, Narisawa T, Fukaura Y, et al. Inhibitory effects of natural carotenoids, α-carotene, β-carotene, lycopene and lutein, on colonic aberrant crypt foci formation in rats [J]. Cancer Lett, 1996, 107(1): 137~142.

86、</p><p>　　[22]Tanaka T, Makita H, Ohnishi H, et al. Chemoprevention of rat oral carcinogenesis by naturally occurring xanthophylls, astaxanthin and canthaxanthin [J]. Cancer Res, 1995, 55(18): 4059~4064.<

87、/p><p>　　[23]Johnson E A, Villa T G, Lewis M J. Phaffia rhodozyma as an astaxanthin source in salmonid diets [J]. Aquaculture, 1980, 20(2): 123~134.</p><p>　　[24]Yamada S, Tanaka Y, Sameshima M, et

88、 al. Pigmentation of prawn (Penaeus japonicus) with carotenoids: I. Effect of dietary astaxanthin, β-carotene and canthaxanthin on pigmentation [J]. Aquaculture, 1990, 87(3~4): 323~330.</p><p>　　[25]Steinbre

89、nner J, Linden H. Light induction of carotenoid biosynthesis genes in the green alga Haematococcus pluvialis: regulation by photosynthetic redox control [J]. Plant Molecular Biology, 2003, 52: 343~356.</p><p&

90、gt;　　[26]Vidhyavathi R, Venkatachalam L, Kamath B S, et al. Differential expression of carotenogenic genes and associated changes in pigment profile during regeneration of Haematococcus pluvialis cysts[J]. Appl Microbiol

91、 and Biotechnol, 2007, 75(4): 879~887.</p><p>　　[27]Grunewald K, Hirschberg J, Hagen C. Ketocarotenoid biosynthesis outside of plastids in the unicellular green alga Haematococcus pluvialis [J]. J Biol Chem,

92、 2001, 276(8): 6023~6029.</p><p>　　[28]劉春朝, 王玉春, 趙兵, 等. 生物誘導(dǎo)子調(diào)節(jié)植物組織次生代謝的研究[J]. 植物學(xué)通報(bào), 1999, 16(2): 131~137.</p><p>　　[29]施中東, 未作君, 元英進(jìn), 等. 南方紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)合成紫杉醇誘導(dǎo)子濃度的優(yōu)化[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 2000, 12(4): 36~4

93、0.</p><p>　　[30]王艷東, 路明, 元英進(jìn). 甲基茉莉酮酸對(duì)懸浮培養(yǎng)南方紅豆杉細(xì)胞代謝的影響[J]. 中草藥, 2003, 34(1): 27~31. </p><p>　　[31]Gong Y F, Liao Z H, Guo B H, et al. Molecular cloning and expression profile analysis of Ginkgo b

94、iloba DXS gene encoding 1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase, the first committed enzyme of the 2-C-methyl-D–erythritol 4-phosphate pathway [J]. Planta Med, 2006, 72: 329~335.</p><p>　　[32]余龍江, 朱敏, 劉幸福, 等

95、. MeJA對(duì)中國(guó)紅豆杉胚性細(xì)胞紫杉醇生物合成的影響[J]. 武漢植物學(xué)研究,1999,17(4): 371~374.</p><p>　　[33]王保軍, 張秀清, 孫立偉, 等. 茉莉酸甲酯（MeJA）對(duì)貫葉連翹懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)和貫葉金絲桃素產(chǎn)量的影響[J]. 植物生理學(xué)通訊, 2008, 44(4): 669~672.</p><p>　　[34]楊英, 鄭輝, 何峰. 不同濃度茉莉酸甲

96、酯對(duì)懸浮培養(yǎng)的脹果甘草細(xì)胞合成甘草總黃酮的影響[J]. 云南植物研究, 2008, 30(5): 586~592.</p><p>　　[35]王學(xué)勇, 崔光紅, 黃璐琦, 等. 茉莉酸甲酯對(duì)丹參毛狀根中丹參酮類(lèi)成分積累和釋放的影響[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2007, 32(4): 300~302.</p><p>　　[36]張進(jìn)杰, 徐茂軍. NO和茉莉酸甲酯對(duì)黃芩懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)及黃芩苷

97、合成的影響[J]. 植物學(xué)通報(bào), 2006, 23(4): 374~379.</p><p>　　[37]Srinivasan V, Ciddi V, Brigi V, et al. Metabolic inhibitors, elicitors, and precursors as tools for probing yield limitation in taxane production by Taxus

98、chinensis cell cultures [J]. Bitechnol Prog, 1996, 12(4): 457~465.</p><p>　　[38]孫彬賢, 翁穎琦, 劉滌, 等. 代謝中間產(chǎn)物和誘導(dǎo)子對(duì)南方紅豆杉培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和紫杉醇含量的影響[J]. 上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2000, 14(3): 54~57.</p><p>　　[39]李景川, 馬忠海, 元英進(jìn), 等.

99、 鈰對(duì)懸浮培養(yǎng)南方紅豆杉細(xì)胞可溶性蛋白和紫杉醇合成動(dòng)態(tài)的影響[J]. 中國(guó)稀土學(xué)報(bào), 2001, 19(2): 162~167.</p><p>　　[40]胡國(guó)武, 馬征, 王艷東, 等. 稀土對(duì)紅豆杉細(xì)胞中紫杉烯合成酶基因轉(zhuǎn)錄的影響[J]. 中國(guó)稀土學(xué)報(bào), 2000, 18(4): 360~362.</p><p>　　[41]崔堂兵, 張長(zhǎng)遠(yuǎn), 鄭穗平, 等. 稀土元素對(duì)銀杏懸浮培養(yǎng)

100、細(xì)胞生長(zhǎng)和次級(jí)代謝產(chǎn)物積累的影響[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2002, 5: 29~31.</p><p>　　[42]Yuan X F, Wang Q, Zhao B, et al. Improved cell growth and total flavonoids of Saussurea medusa on solid culture medium supplemented with rare earth e

101、lements [J]. Biotechnology Letters, 2002, 24: 1889~1892.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　　（20_ _屆）</b></p><p>　　甲基茉莉酸對(duì)雨生紅球藻蝦青素積累的影響及其分子機(jī)理的研究</p><

102、;p><b>　　目錄</b></p><p><b>　　摘要</b></p><p><b>　　Abstract </b></p><p><b>　　1 引言1</b></p><p><b>　　2 材料與方法1</b&

103、gt;</p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料1</p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)藻種1</p><p>　　2.1.2 培養(yǎng)基1</p><p>　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)常用儀器2</p><p>　　2.1.4 實(shí)驗(yàn)常用試劑2</p><p>　　2.2 培養(yǎng)方法2</p&g