雨生紅球藻中蝦青素的分離提取及其性質(zhì)的研究.pdf

1、蝦青素是一種具有強(qiáng)抗氧化作用的類胡蘿卜素。本文以雨生紅球藻藻粉為原料，建立了分析測(cè)定蝦青素的方法，優(yōu)化了常規(guī)溶劑提取、微波提取、超聲波提取以蝦青素酯為主的粗色素油的工藝條件，采用響應(yīng)面法優(yōu)化了蝦青素酯的皂化條件，利用大孔樹脂和硅膠柱層析對(duì)蝦青素提取物進(jìn)行了除堿和分離純化，研究了Cu2+、微波、超聲波對(duì)反式蝦青素穩(wěn)定性的影響以及皂化前后的提取物的抗氧化活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.建立了分析測(cè)定雨生紅球藻中蝦青素的薄層色譜法、分光光度

2、法、高效液相色譜法。薄層色譜法用于分離雨生紅球藻中的蝦青素合適的展開劑為正己烷:丙酮=7:3，展開時(shí)間為10min；分光光度法測(cè)定乙酸乙酯和乙醇的混合溶劑提取的粗色素油的測(cè)定波長(zhǎng)為472nm，加樣回收率為101.97％～104.69％，RSD為0.91％～2.09％；高效液相色譜法的條件為：KromasilC18柱(250×4.6mm)，流動(dòng)相為二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=5:85:5:5，檢測(cè)波長(zhǎng)480nm，流速1mL/min，柱溫25

3、℃，進(jìn)樣量20μL，該方法回收率為99.69％～102.60％，RSD為0.14％～0.49％。 2.確定了體積比為1:2的乙酸乙酯和乙醇為提取雨生紅球藻中蝦青素的適宜溶劑；對(duì)常規(guī)溶劑提取、微波提取、超聲波提取蝦青素酯為主的粗色素油的條件進(jìn)行了優(yōu)化。常規(guī)溶劑提取法的最佳條件為：溫度為25℃、提取次數(shù)為2次，提取時(shí)間為6h、固液比為1:60(g/mL)；微波提取的最佳條件為：功率為141W、提取時(shí)間為83sec、固液比為1:50(

4、g/mL)，提取次數(shù)為4次；超聲波提取的最佳條件為：功率為163W、提取時(shí)間為3min、固液比為1:35(g/mL)，提取次數(shù)為4次。與常規(guī)溶劑提取相比，微波提取法耗時(shí)短、提取量高，適合于雨生紅球藻中蝦青素的提取，而超聲波法在這種色素的提取上沒有表現(xiàn)出自身的優(yōu)越性。 3.4℃下的最佳皂化條件為：皂化時(shí)間11.45h、粗色素油濃度6.19mg/ml、KOH的濃度0.045M，加熱條件下蝦青素酯的最佳皂化條件為：粗色素油濃度4.56

5、mg/mL、堿的濃度0.054M、皂化溫度30℃，皂化時(shí)間20min。兩種優(yōu)化條件下得到的游離蝦青素的量之間無顯著性差異(P＞0.05)。 4.采用HPD100型吸附樹脂吸附，經(jīng)過水-乙醇-丙酮分步洗脫，可以達(dá)到除堿和初步純化的目的，再用ZCX-Ⅱ型硅膠作為固定相，用正己烷-正己烷:丙酮(7:3，V/V)-丙酮分步洗脫，收集液真空濃縮后，可以得到含游離蝦青素8.3％的膏狀提取物。 5.研究了化學(xué)因素(Cu2+)和物理因素

6、(微波、超聲波)對(duì)反式蝦青素穩(wěn)定性的影響。人體必需的微量元素之一銅和微波、超聲波這兩種常用的輔助提取方法都降低了反式蝦青素的穩(wěn)定性，Cu2+和微波處理使反式蝦青素發(fā)生了異構(gòu)化。與Cu2+和微波處理不同，超聲波處理并沒有導(dǎo)致順式異構(gòu)體的產(chǎn)生，很可能將反式蝦青素降解成其它無色的化合物，它們?cè)?94nm和324nm附近有吸收。 6.雨生紅球藻提取物皂化前后都具有抑制亞油酸氧化、清除DPPH自由基、還原三價(jià)鐵離子、抑制LOX酶活性的能力