雨生紅球藻蝦青素酯的純化、活性研究及不同蝦青素的鑒定.pdf

1、蝦青素是一種萜烯類的類胡蘿卜素，具有良好的著色功能和極強(qiáng)的生物活性。不同來(lái)源的蝦青素由不同的同分異構(gòu)體組成，其活性之間也存在較大差別。雨生紅球藻是天然蝦青素的主要來(lái)源，其蝦青素主要以蝦青素酯的形式存在。但由于蝦青素酯結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性及傳統(tǒng)分離純化方法的局限性，目前高效分離純化蝦青素酯的研究尚不多見(jiàn)。本論文使用高速逆流色譜（HSCCC）分離純化雨生紅球藻蝦青素酯，應(yīng)用 HPLC和 ESI-MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，進(jìn)一步研究蝦青素酯的生物活性，并建立

2、鑒定不同來(lái)源蝦青素的方法，主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　?。?）以總類胡蘿卜素含量為指標(biāo)，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)化得到雨生紅球藻中類胡蘿卜素提取的最佳條件為：破壁溫度50 oC、破壁時(shí)間30 min、纖維素酶濃度0.6 mg/mL、酶反應(yīng) pH4.0，優(yōu)化后提取物中總類胡蘿卜素的含量高達(dá)59.62±0.31 mg/g DW，比優(yōu)化前提高了25％。
　?。?）應(yīng)用正己烷-乙腈-甲醇（4:1:2，v/v/v）和正己烷-甲醇（2:1

3、，v/v）兩種溶劑體系，首次利用高速逆流色譜（HSCCC）技術(shù)從100 mg雨生紅球藻粗提物中分離純化得到角黃素（10.35 mg）、蝦青素十六碳二烯酸單酯（8.47 mg）、蝦青素亞麻酸單酯（15.65 mg）、蝦青素亞油酸單酯（6.05 mg）、β-胡蘿卜素（15.25 mg）、蝦青素棕櫚酸-二十二碳二烯酸雙酯（4.33 mg）。
　　（3）以蝦青素和維生素 E為對(duì)照，研究蝦青素單酯的抗氧化活性。結(jié)果表明，蝦青素單酯清除ABT

4、S+、·OH自由基的EC50值分別為7.09±0.20μg/mL和11.08±0.76μg/mL，清除能力強(qiáng)于維生素 E，但弱于蝦青素；對(duì)油脂過(guò)氧化具有一定的抑制作用；具有一定的鐵離子還原能力，其FRAP值為0.236±0.021 mmol/L。以熊果苷和奧利司他為對(duì)照，測(cè)定了蝦青素單酯對(duì)蘑菇酪氨酸酶和胰脂肪酶的抑制作用。結(jié)果表明，當(dāng)蝦青素單酯濃度為800μg/mL時(shí)，對(duì)蘑菇酪氨酸酶的抑制率為39.48%；蝦青素單酯對(duì)胰脂肪酶有較好的抑

5、制作用，IC50值為9.85±0.02μg/mL。
　　（4）使用YMC Carotenoid C30(4.6×250 mm)色譜柱，采用單因素試驗(yàn)法優(yōu)化得到分離蝦青素異構(gòu)體的最佳 HPLC條件。樣品濃度：5 mg/mL，進(jìn)樣量：20μL，流速：1.0 mL/min，柱溫：35 oC，檢測(cè)波長(zhǎng)：474 nm，流動(dòng)相：甲醇-乙腈-MTBE。在此基礎(chǔ)上建立了一種鑒定不同來(lái)源蝦青素的方法。
　　本論文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為蝦青素酯的大量制備