利谷隆致雄性仔鼠的生殖毒性及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討利谷隆致雄性仔鼠的生殖毒性及其機(jī)制。
　　 方法：孕期妊娠第13-18天時(shí)用花生油溶解利谷隆(0、50、100、150、200mg/kg)灌胃染毒，于孕期妊娠(GD)20天各組解剖數(shù)只孕鼠，提取雄性胎鼠尿生殖結(jié)節(jié)和睪丸做病理切片；于雄性子代出生后28d測(cè)量肛殖距(anogenital distance，AGD)和稱重；于雄性子代出生后第2天用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbentass

2、ay，ELISA)檢測(cè)睪酮激素水平；在胚胎20d解剖孕鼠，提取雄性胎鼠睪丸做電鏡觀察睪丸間質(zhì)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的變化、免疫組織化學(xué)檢測(cè)睪丸間質(zhì)細(xì)胞中P450scc、3β-HSD、PCNA蛋白，AR的表達(dá)情況，用實(shí)時(shí)熒光定量的RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)睪丸間質(zhì)細(xì)胞中P450c17、17β-HSD、PCNA、AR基因表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1.各組之間雄性仔鼠體重?zé)o明顯差異。在一定的劑量范圍內(nèi)，隨著染毒劑量的增加，用藥組AGD隨之有縮短的趨勢(shì)

3、。2.LIN染毒組與空白LIN Omg/kg對(duì)比，病理見睪丸索變細(xì)，睪丸內(nèi)各細(xì)胞空泡變性，核固縮增多。3.LIN染毒組雄性子代出生后第2d睪酮激素水平較LIN Omg/kg降低。4.電鏡觀察結(jié)果：睪丸間質(zhì)細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，線粒體腫脹。5.免疫組織化學(xué)結(jié)果：在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中P450scc酶、3β-HSD、PCNA蛋白表達(dá)降低(P均<0.05)，AR蛋白表達(dá)與LIN Omg/kg相近(P>0.05)。6.實(shí)時(shí)熒光定量的RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示

4、：在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中P450c17基因，17β-HSD、PCNA基因表達(dá)減弱(P均(0.05)，AR基因表達(dá)與LIN Omg/kg相近(P>0.05)。
　　 結(jié)論：孕期暴露LIN可透過胎盤屏障，對(duì)雄性仔鼠造成如下影響：1.各染毒組與LINOmg/kg之間體重?zé)o差異。在一定的劑量范圍內(nèi)，隨著染毒劑量的增加，染毒組AGD隨之有縮短的趨勢(shì)。2.染毒組與空白LIN Omg/kg對(duì)比病理見睪丸索變細(xì)，睪丸內(nèi)各細(xì)胞空泡變性，核固縮增多。3.

5、ELISA顯示：除染毒組50mg/kg外，其以上劑量可使睪酮激素水平降低，可見睪酮激素分泌水平與染毒劑量之間具有劑量效應(yīng)關(guān)系。4。電鏡觀察結(jié)果證實(shí)了LIN能夠引起大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，線粒體腫脹，從而導(dǎo)致睪酮激素的合成障礙。5.免疫組化顯示LIN能夠降低睪丸間質(zhì)細(xì)胞中合成睪酮代謝酶P450scc和3β-HSD，PCNA酶蛋白的活性表達(dá)，從而影響睪酮的產(chǎn)生。6.實(shí)時(shí)熒光定量的RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示：LIN降低了P450c17，17