乙烯利對(duì)雄性小鼠生殖毒性和免疫毒性作用的研究.pdf

1、乙烯利(ethephon)(40％的水劑也叫一試靈)是一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑型農(nóng)藥，主要作用是促進(jìn)果實(shí)的成熟;在某些果品的保存和遠(yuǎn)距離運(yùn)輸?shù)确矫姘l(fā)揮著巨大的作用。目前很多瓜果蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品在上市前大多使用乙烯利作為催熟劑。近年來(lái)，很多不法商販和果農(nóng)為了獲取更大的經(jīng)濟(jì)利益，過(guò)量使用和濫用乙烯利的現(xiàn)象越來(lái)越嚴(yán)重。乙烯利的超量濫施濫用造成果蔬中乙烯利殘留嚴(yán)重超標(biāo)，乙烯利殘留在水果并進(jìn)入人體，會(huì)對(duì)健康產(chǎn)生一定的影響。乙烯利毒性研究報(bào)道較少，有個(gè)別文獻(xiàn)

2、報(bào)道乙烯利能引起小鼠的生殖毒性并能產(chǎn)生一定的免疫毒性作用，本實(shí)驗(yàn)深入系統(tǒng)地探討了乙烯利對(duì)昆明種雄性小鼠的生殖功能和免疫功能的毒性作用。
　　研究目的:
　　探討乙烯利對(duì)雄性小鼠生殖系統(tǒng)的影響和對(duì)免疫系統(tǒng)的毒性作用，為今后深入、系統(tǒng)地探討乙烯利的毒性作用及其毒性作用機(jī)制等研究提供線索。
　　研究方法:
　　1、雄性小鼠隨機(jī)分為4組，每組20只，實(shí)驗(yàn)設(shè)四個(gè)劑量組，分別設(shè)低劑量染毒組(85mg/kg，1/32LD50)

3、、中劑量染毒組(170mg/kg，1/16LD50)和高劑量染毒組(340mg/kg，1/8LD50)，另設(shè)陰性對(duì)照組（生理鹽水），經(jīng)口灌胃染毒，連續(xù)染毒14天，1次/天，隨時(shí)觀察雄性小鼠的生長(zhǎng)情況。從首次給藥第15天起以1∶1與雌性小鼠合籠。從合籠的第2天起，每天早晨8點(diǎn)左右觀察并記錄雌性小鼠陰栓出現(xiàn)情況，以此作為雄性小鼠性欲功能的指標(biāo)。于合籠后第21天以頸椎脫臼處死雌性小鼠，剖腹檢查，計(jì)算受孕率和生育仔鼠數(shù)。于首次給藥后第28天采用

4、頸椎脫臼法處死雄性小鼠，摘取睪丸、附睪及精囊腺，肉眼觀察并稱重。
　　觀察乙烯利對(duì)雄性小鼠精子質(zhì)量的影響及睪丸組織的病理學(xué)改變，用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)對(duì)每組10只雄性小鼠的睪丸生精細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)行測(cè)定，并選用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNEL)進(jìn)行雄性小鼠的睪丸生精細(xì)胞凋亡情況的分析。
　　2、將健康成年SPF級(jí)雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，實(shí)驗(yàn)組設(shè)低劑量染毒組(85mg/kg)、中劑量染毒組(170mg/kg)

5、和高劑量染毒組(340mg/kg)，染毒劑量相當(dāng)于乙烯利的1/32LD50、1/16LD50、1/8LD50;另設(shè)陰性對(duì)照組（生理鹽水）。選用經(jīng)口灌胃方法進(jìn)行染毒，染毒容量為20ml/kg，分別給予雄性小鼠不同劑量的乙烯利溶液，每天1次，連續(xù)染毒14天。于首次給藥后第28天，采用摘眼球取血法采血2 ml，頸椎脫臼法處死小鼠，迅速摘取脾臟和胸腺，肉眼觀察并稱重。檢測(cè)并觀察分析小鼠外周血的血液學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)和淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期的變化情況。選用流式

6、細(xì)胞技術(shù)(FCM)對(duì)每組6只雄性小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測(cè)，并觀察對(duì)脾臟淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+及胸腺淋巴細(xì)胞CD4+、CD8+比例的影響。
　　研究結(jié)果:
　　1、乙烯利對(duì)雌雄小鼠生殖系統(tǒng)的影響
　　與陰性對(duì)照組相比較，中、高劑量染毒組雄性小鼠體重明顯減輕（P＜0.05），高劑量染毒組雌性小鼠受孕率、雄性小鼠精囊腺重量和精子計(jì)數(shù)明顯減少(P＜0.05）;各劑量染毒組雄性小鼠精子活動(dòng)率均低于陰性

7、對(duì)照組(P＜0.05）;各劑量染毒組雄性小鼠精子畸形率均高于陰性對(duì)照組(P＜0.05);中、高劑量染毒組雄性小鼠睪丸組織病理學(xué)檢查可見(jiàn)明顯異常。與陰性對(duì)照組相比，中、高劑量染毒組雄性小鼠的單倍體細(xì)胞細(xì)胞比例明顯減少，中、高劑量染毒組雄性小鼠的二倍體細(xì)胞和四倍體細(xì)胞的細(xì)胞比例明顯升高，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);中、高劑量染毒組雄性小鼠1C∶4C和1C∶2C呈下降趨勢(shì)，與陰性對(duì)照組比較其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);各

8、劑量染毒組雄性小鼠睪丸組織生精細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率均升高(P＜0.05)。
　　2、乙烯利對(duì)雄性小鼠外周血常規(guī)及淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期的影響
　　各劑量染毒組雄性小鼠外周血的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(LYM)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)和血紅蛋白(HGB)、嗜中性粒細(xì)胞(NEU)含量及淋巴細(xì)胞百分比(LYM％)以及淋巴細(xì)胞G0/G1期、S期、G2/M期細(xì)胞所占比例與陰性對(duì)照組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

9、　　3、乙烯利對(duì)雄性小鼠脾臟和胸腺細(xì)胞周期及淋巴細(xì)胞亞群的影響
　　本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)與陰性對(duì)照組比較，中、高劑量染毒組雄性小鼠脾臟G2/M期細(xì)胞數(shù)所占比例升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);各劑量染毒組雄性小鼠脾臟S期和G0/G1期細(xì)胞數(shù)所占比例均無(wú)顯著改變。
　　與陰性對(duì)照組相比，高劑量染毒組雄性小鼠脾臟淋巴細(xì)胞CD3+比例明顯升高(P＜0.05);各劑量染毒組雄性小鼠胸腺淋巴細(xì)胞CD8+比例明顯升高(P＜0.05)，

10、CD4+/CD8+比值下降(P＜0.05);中、高劑量染毒組雄性小鼠胸腺淋巴細(xì)胞CD4+比例升高(P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　1、乙烯利對(duì)雄性小鼠產(chǎn)生了一定的生殖毒作用，能使雄性生育力下降，睪丸組織的生精細(xì)胞凋亡率升高。
　　2、乙烯利能引起雄性小鼠生精細(xì)胞比例的變化，1C∶4C和1C∶2C的相對(duì)下降，阻滯小鼠生精細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程。
　　3、本研究尚未發(fā)現(xiàn)乙烯利能引起雄性小鼠外周血血液學(xué)各指標(biāo)及外周血