乙烯利對雄性小鼠生殖毒性和免疫毒性作用的研究.pdf

1、乙烯利(ethephon)(40％的水劑也叫一試靈)是一種植物生長調節(jié)劑型農藥，主要作用是促進果實的成熟;在某些果品的保存和遠距離運輸等方面發(fā)揮著巨大的作用。目前很多瓜果蔬菜等農產品在上市前大多使用乙烯利作為催熟劑。近年來，很多不法商販和果農為了獲取更大的經濟利益，過量使用和濫用乙烯利的現象越來越嚴重。乙烯利的超量濫施濫用造成果蔬中乙烯利殘留嚴重超標，乙烯利殘留在水果并進入人體，會對健康產生一定的影響。乙烯利毒性研究報道較少，有個別文獻

2、報道乙烯利能引起小鼠的生殖毒性并能產生一定的免疫毒性作用，本實驗深入系統(tǒng)地探討了乙烯利對昆明種雄性小鼠的生殖功能和免疫功能的毒性作用。
　　研究目的:
　　探討乙烯利對雄性小鼠生殖系統(tǒng)的影響和對免疫系統(tǒng)的毒性作用，為今后深入、系統(tǒng)地探討乙烯利的毒性作用及其毒性作用機制等研究提供線索。
　　研究方法:
　　1、雄性小鼠隨機分為4組，每組20只，實驗設四個劑量組，分別設低劑量染毒組(85mg/kg，1/32LD50)

3、、中劑量染毒組(170mg/kg，1/16LD50)和高劑量染毒組(340mg/kg，1/8LD50)，另設陰性對照組（生理鹽水），經口灌胃染毒，連續(xù)染毒14天，1次/天，隨時觀察雄性小鼠的生長情況。從首次給藥第15天起以1∶1與雌性小鼠合籠。從合籠的第2天起，每天早晨8點左右觀察并記錄雌性小鼠陰栓出現情況，以此作為雄性小鼠性欲功能的指標。于合籠后第21天以頸椎脫臼處死雌性小鼠，剖腹檢查，計算受孕率和生育仔鼠數。于首次給藥后第28天采用

4、頸椎脫臼法處死雄性小鼠，摘取睪丸、附睪及精囊腺，肉眼觀察并稱重。
　　觀察乙烯利對雄性小鼠精子質量的影響及睪丸組織的病理學改變，用流式細胞技術(FCM)對每組10只雄性小鼠的睪丸生精細胞的細胞周期進行測定，并選用原位末端轉移酶標記法(TUNEL)進行雄性小鼠的睪丸生精細胞凋亡情況的分析。
　　2、將健康成年SPF級雄性昆明種小鼠隨機分為4組，每組10只，實驗組設低劑量染毒組(85mg/kg)、中劑量染毒組(170mg/kg)

5、和高劑量染毒組(340mg/kg)，染毒劑量相當于乙烯利的1/32LD50、1/16LD50、1/8LD50;另設陰性對照組（生理鹽水）。選用經口灌胃方法進行染毒，染毒容量為20ml/kg，分別給予雄性小鼠不同劑量的乙烯利溶液，每天1次，連續(xù)染毒14天。于首次給藥后第28天，采用摘眼球取血法采血2 ml，頸椎脫臼法處死小鼠，迅速摘取脾臟和胸腺，肉眼觀察并稱重。檢測并觀察分析小鼠外周血的血液學各項指標和淋巴細胞細胞周期的變化情況。選用流式

6、細胞技術(FCM)對每組6只雄性小鼠脾細胞和胸腺細胞進行細胞周期的檢測，并觀察對脾臟淋巴細胞CD3+、CD4+、CD8+及胸腺淋巴細胞CD4+、CD8+比例的影響。
　　研究結果:
　　1、乙烯利對雌雄小鼠生殖系統(tǒng)的影響
　　與陰性對照組相比較，中、高劑量染毒組雄性小鼠體重明顯減輕（P＜0.05），高劑量染毒組雌性小鼠受孕率、雄性小鼠精囊腺重量和精子計數明顯減少(P＜0.05）;各劑量染毒組雄性小鼠精子活動率均低于陰性

7、對照組(P＜0.05）;各劑量染毒組雄性小鼠精子畸形率均高于陰性對照組(P＜0.05);中、高劑量染毒組雄性小鼠睪丸組織病理學檢查可見明顯異常。與陰性對照組相比，中、高劑量染毒組雄性小鼠的單倍體細胞細胞比例明顯減少，中、高劑量染毒組雄性小鼠的二倍體細胞和四倍體細胞的細胞比例明顯升高，其差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);中、高劑量染毒組雄性小鼠1C∶4C和1C∶2C呈下降趨勢，與陰性對照組比較其差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);各

8、劑量染毒組雄性小鼠睪丸組織生精細胞的細胞凋亡率均升高(P＜0.05)。
　　2、乙烯利對雄性小鼠外周血常規(guī)及淋巴細胞細胞周期的影響
　　各劑量染毒組雄性小鼠外周血的紅細胞計數(RBC)、白細胞計數(WBC)、淋巴細胞計數(LYM)、血小板計數(PLT)和血紅蛋白(HGB)、嗜中性粒細胞(NEU)含量及淋巴細胞百分比(LYM％)以及淋巴細胞G0/G1期、S期、G2/M期細胞所占比例與陰性對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義。

9、　　3、乙烯利對雄性小鼠脾臟和胸腺細胞周期及淋巴細胞亞群的影響
　　本試驗研究發(fā)現與陰性對照組比較，中、高劑量染毒組雄性小鼠脾臟G2/M期細胞數所占比例升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);各劑量染毒組雄性小鼠脾臟S期和G0/G1期細胞數所占比例均無顯著改變。
　　與陰性對照組相比，高劑量染毒組雄性小鼠脾臟淋巴細胞CD3+比例明顯升高(P＜0.05);各劑量染毒組雄性小鼠胸腺淋巴細胞CD8+比例明顯升高(P＜0.05)，

10、CD4+/CD8+比值下降(P＜0.05);中、高劑量染毒組雄性小鼠胸腺淋巴細胞CD4+比例升高(P＜0.05)。
　　研究結論:
　　1、乙烯利對雄性小鼠產生了一定的生殖毒作用，能使雄性生育力下降，睪丸組織的生精細胞凋亡率升高。
　　2、乙烯利能引起雄性小鼠生精細胞比例的變化，1C∶4C和1C∶2C的相對下降，阻滯小鼠生精細胞的細胞周期進程。
　　3、本研究尚未發(fā)現乙烯利能引起雄性小鼠外周血血液學各指標及外周血