牛蒡等中草藥植物對(duì)柑桔全爪螨的殺螨活性研究.pdf

1、柑桔全爪螨Panonychus citri(McGregor)是我國(guó)柑桔生產(chǎn)上最主要的害螨，世代歷期短，繁殖力強(qiáng)、防治上用藥頻繁。隨著螨類對(duì)化學(xué)藥劑抗藥性增強(qiáng)，農(nóng)藥的使用數(shù)量逐年增加，引起了人們對(duì)應(yīng)用有毒化學(xué)品所導(dǎo)致的直接或間接潛在危險(xiǎn)和危害的重視。因此，符合環(huán)保、健康理念的高效、低毒、低殘留、與環(huán)境相容的農(nóng)藥成為當(dāng)今農(nóng)藥研究的主題。其中，從天然植物中尋找殺螨成分，進(jìn)行植物源農(nóng)藥的研究是最誘人也是最熱門的話題。 本文主要研究了牛

2、蒡等廣泛分布于我國(guó)各地區(qū)的15科30種中草藥植物的殺螨活性，對(duì)牛蒡殺螨活性物質(zhì)進(jìn)行分離、純化和鑒定，研究了部分殺螨作用機(jī)理，取得的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1．采用乙醇作為提取劑，超聲波萃取法對(duì)30種中草藥植物進(jìn)行提取，室內(nèi)生物測(cè)定方法評(píng)價(jià)其殺螨活性。結(jié)果表明，處理24h后，30種植物提取物(濃度為1g/ml)對(duì)柑桔全爪螨雌成螨、卵的觸殺活性表明，大多數(shù)供試植物表現(xiàn)出較好的雌成螨觸殺活性，沒有發(fā)現(xiàn)對(duì)害蟲有負(fù)殺蟲效應(yīng)的植物提取物。黃連、

3、草烏、牛蒡、小茴香的校正死亡率大于90％，活性較高；白術(shù)、苦參、藁本、前胡、厚樸、羌活、川芎、五加皮、孔雀草、側(cè)柏的校正死亡率為60％～90％，活性中等；其余植物提取物均活性較差?？鄥ⅰ⑥槐?、草烏、茴香提取物表現(xiàn)出較好的殺雌成螨活性，LC50在0.0658g/L～0.1385 g/L之間，但殺卵的校正死亡率僅為3.775％～48.16％，LC50在144.1805 g/L～1628.90 g/L之間。牛蒡提取物對(duì)雌成螨、卵的觸殺毒力的L

4、C50值分別為0.0750 g/L和3.8562 g/L、產(chǎn)卵抑制率為75％，殺螨活性最佳。 2．通過不同極性溶劑萃取法、柱色譜法和薄層層析分離技術(shù)對(duì)牛蒡乙醇提取物進(jìn)行了活性成分分離，測(cè)定了不同分離組分對(duì)柑桔全爪螨的觸殺活性。牛蒡乙醇提取物以氯仿作為溶劑的萃取率最高(1.85％)，石油醚其次(0.63％)，乙酸乙酯最低(0.23％)。3種萃取物經(jīng)葉片浸漬法進(jìn)行活性測(cè)定，石油醚部分觸殺殺螨活性最強(qiáng)，LC50值為0.0801 g/L

5、，氯仿部分的LC50值為1.8740 g/L，表明牛蒡有效成分主要存中于極性偏弱的石油醚、氯仿萃取部分。合并石油醚、氯仿組分，經(jīng)大柱初分，中柱細(xì)分，最后分離出四個(gè)流分，經(jīng)葉片浸漬法生物活性測(cè)定，流分L1-2對(duì)柑桔全爪螨的觸殺毒力高達(dá)0.0025 g/L。經(jīng)紫外吸收和顏色反應(yīng)法鑒定，推測(cè)流分L1-2中含有共軛雙鍵或三鍵。氣相質(zhì)譜—質(zhì)譜聯(lián)用鑒定結(jié)果顯示，牛蒡萃取物L(fēng)1-2組分中主要包括十六碳烷酸甲酯、十八碳烷酸甲酯、三十碳烷酸甲酯、三十一碳

6、烷酸甲酯、十八碳二烯酸甲酯等9種主要成分，總含量達(dá)到85.32％：還有少量醛類、烯醇、烯烴類物質(zhì)。 3．L1-2組分(濃度為4.668μg/μl)處理后，柑桔全爪螨活動(dòng)分為以下幾個(gè)階段：靜止期(0～5h)：螨明顯靜止，無明顯反應(yīng)；興奮期(5～7h)：運(yùn)動(dòng)不停，步態(tài)失調(diào)，站立不穩(wěn)；螨體開始出現(xiàn)膨脹，大部分從暗紅色變?yōu)轷r紅色；痙攣期(7～14h)：過度興奮，蟲身翻倒，八足交錯(cuò)擺動(dòng)；螨體向一側(cè)傾斜，足痙攣；停止顫抖，全足抽搐；少數(shù)擴(kuò)散

7、逃逸；排泄物極少，呈黑色；產(chǎn)卵量急劇下降；螨體顏色鮮亮；麻痹期(14～18h)：螨體靜止不動(dòng)，身體開始萎縮；死亡期(18～24h)：身體逐漸收縮至死亡。 4．研究了活性組分對(duì)CarE、AChE、GSTs三種螨類常見酶類的影響。結(jié)果表明：離體試驗(yàn)中，L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨CarE、AChE、GSTs的比活力隨著濃度的增加呈降低趨勢(shì)，這表明L1-2組分對(duì)CarE、AChE、GSTs有顯著的抑制作用，且處理間差異顯著。活體試驗(yàn)中，L

8、1-2組分對(duì)CarE有強(qiáng)烈的先激活再抑制的作用。12h前對(duì)CarE的作用效果表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用，隨著濃度的提高比活力分別增加了44.72％、33.13％、27.3％、17.34％、10.08％。12h后，當(dāng)提取物濃度為0.2344μg/μl時(shí)，對(duì)CarE的作用效果表現(xiàn)為抑制，且隨著濃度的增大抑制效果顯著提高。處理12 h后，L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨AChE活力表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用，隨著濃度的升高比活力分別增加了27.95％、32.76％、30.6

9、3％、10.18％、3.69％。24h后，當(dāng)L1-2組分濃度為0.4688×10-3μg/μl時(shí)，柑桔全爪螨AChE開始受到抑制，且隨著濃度的升高抑制作用逐漸增強(qiáng)。當(dāng)濃度為4688μg/μl時(shí)抑制作用急劇增強(qiáng)，達(dá)到64.07％。處理12h后，L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨GSTs表現(xiàn)為抑制作用，隨著濃度的提高而迅速上升。24 h后，當(dāng)L1-2組分濃度為0.2344×10-1時(shí)，對(duì)柑桔全爪螨GSTs抑制作用高達(dá)到38.94％?；铙w實(shí)驗(yàn)初期，活性

10、成分對(duì)三種常見酶系的敏感性并不一致，對(duì)GSTs迅速表現(xiàn)為抑制作用。隨著濃度的提高和時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)AChE、CarE抑制作用出現(xiàn)并迅速上升。表明L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨三種常見酶系的作用與時(shí)間和濃度關(guān)系密切，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增大，抑制作用逐漸增強(qiáng)。 牛蒡?yàn)槌Ｓ媒獗眍愔胁菟?，植物資源豐富，其揮發(fā)油被認(rèn)為是良好的保健食用油，作為植物源農(nóng)藥的來源相對(duì)安全。牛蒡含有的9，12-Octadecanoic acid methyl est