牛蒡等中草藥植物對柑桔全爪螨的殺螨活性研究.pdf

1、柑桔全爪螨Panonychus citri(McGregor)是我國柑桔生產(chǎn)上最主要的害螨，世代歷期短，繁殖力強、防治上用藥頻繁。隨著螨類對化學藥劑抗藥性增強，農(nóng)藥的使用數(shù)量逐年增加，引起了人們對應用有毒化學品所導致的直接或間接潛在危險和危害的重視。因此，符合環(huán)保、健康理念的高效、低毒、低殘留、與環(huán)境相容的農(nóng)藥成為當今農(nóng)藥研究的主題。其中，從天然植物中尋找殺螨成分，進行植物源農(nóng)藥的研究是最誘人也是最熱門的話題。 本文主要研究了牛

2、蒡等廣泛分布于我國各地區(qū)的15科30種中草藥植物的殺螨活性，對牛蒡殺螨活性物質(zhì)進行分離、純化和鑒定，研究了部分殺螨作用機理，取得的主要實驗結果如下： 1．采用乙醇作為提取劑，超聲波萃取法對30種中草藥植物進行提取，室內(nèi)生物測定方法評價其殺螨活性。結果表明，處理24h后，30種植物提取物(濃度為1g/ml)對柑桔全爪螨雌成螨、卵的觸殺活性表明，大多數(shù)供試植物表現(xiàn)出較好的雌成螨觸殺活性，沒有發(fā)現(xiàn)對害蟲有負殺蟲效應的植物提取物。黃連、

3、草烏、牛蒡、小茴香的校正死亡率大于90％，活性較高；白術、苦參、藁本、前胡、厚樸、羌活、川芎、五加皮、孔雀草、側柏的校正死亡率為60％～90％，活性中等；其余植物提取物均活性較差?？鄥?、藁本、草烏、茴香提取物表現(xiàn)出較好的殺雌成螨活性，LC50在0.0658g/L～0.1385 g/L之間，但殺卵的校正死亡率僅為3.775％～48.16％，LC50在144.1805 g/L～1628.90 g/L之間。牛蒡提取物對雌成螨、卵的觸殺毒力的L

4、C50值分別為0.0750 g/L和3.8562 g/L、產(chǎn)卵抑制率為75％，殺螨活性最佳。 2．通過不同極性溶劑萃取法、柱色譜法和薄層層析分離技術對牛蒡乙醇提取物進行了活性成分分離，測定了不同分離組分對柑桔全爪螨的觸殺活性。牛蒡乙醇提取物以氯仿作為溶劑的萃取率最高(1.85％)，石油醚其次(0.63％)，乙酸乙酯最低(0.23％)。3種萃取物經(jīng)葉片浸漬法進行活性測定，石油醚部分觸殺殺螨活性最強，LC50值為0.0801 g/L

5、，氯仿部分的LC50值為1.8740 g/L，表明牛蒡有效成分主要存中于極性偏弱的石油醚、氯仿萃取部分。合并石油醚、氯仿組分，經(jīng)大柱初分，中柱細分，最后分離出四個流分，經(jīng)葉片浸漬法生物活性測定，流分L1-2對柑桔全爪螨的觸殺毒力高達0.0025 g/L。經(jīng)紫外吸收和顏色反應法鑒定，推測流分L1-2中含有共軛雙鍵或三鍵。氣相質(zhì)譜—質(zhì)譜聯(lián)用鑒定結果顯示，牛蒡萃取物L1-2組分中主要包括十六碳烷酸甲酯、十八碳烷酸甲酯、三十碳烷酸甲酯、三十一碳

6、烷酸甲酯、十八碳二烯酸甲酯等9種主要成分，總含量達到85.32％：還有少量醛類、烯醇、烯烴類物質(zhì)。 3．L1-2組分(濃度為4.668μg/μl)處理后，柑桔全爪螨活動分為以下幾個階段：靜止期(0～5h)：螨明顯靜止，無明顯反應；興奮期(5～7h)：運動不停，步態(tài)失調(diào)，站立不穩(wěn)；螨體開始出現(xiàn)膨脹，大部分從暗紅色變?yōu)轷r紅色；痙攣期(7～14h)：過度興奮，蟲身翻倒，八足交錯擺動；螨體向一側傾斜，足痙攣；停止顫抖，全足抽搐；少數(shù)擴散

7、逃逸；排泄物極少，呈黑色；產(chǎn)卵量急劇下降；螨體顏色鮮亮；麻痹期(14～18h)：螨體靜止不動，身體開始萎縮；死亡期(18～24h)：身體逐漸收縮至死亡。 4．研究了活性組分對CarE、AChE、GSTs三種螨類常見酶類的影響。結果表明：離體試驗中，L1-2組分對柑桔全爪螨CarE、AChE、GSTs的比活力隨著濃度的增加呈降低趨勢，這表明L1-2組分對CarE、AChE、GSTs有顯著的抑制作用，且處理間差異顯著?；铙w試驗中，L

8、1-2組分對CarE有強烈的先激活再抑制的作用。12h前對CarE的作用效果表現(xiàn)為誘導作用，隨著濃度的提高比活力分別增加了44.72％、33.13％、27.3％、17.34％、10.08％。12h后，當提取物濃度為0.2344μg/μl時，對CarE的作用效果表現(xiàn)為抑制，且隨著濃度的增大抑制效果顯著提高。處理12 h后，L1-2組分對柑桔全爪螨AChE活力表現(xiàn)為誘導作用，隨著濃度的升高比活力分別增加了27.95％、32.76％、30.6

9、3％、10.18％、3.69％。24h后，當L1-2組分濃度為0.4688×10-3μg/μl時，柑桔全爪螨AChE開始受到抑制，且隨著濃度的升高抑制作用逐漸增強。當濃度為4688μg/μl時抑制作用急劇增強，達到64.07％。處理12h后，L1-2組分對柑桔全爪螨GSTs表現(xiàn)為抑制作用，隨著濃度的提高而迅速上升。24 h后，當L1-2組分濃度為0.2344×10-1時，對柑桔全爪螨GSTs抑制作用高達到38.94％?；铙w實驗初期，活性

10、成分對三種常見酶系的敏感性并不一致，對GSTs迅速表現(xiàn)為抑制作用。隨著濃度的提高和時間的延長，對AChE、CarE抑制作用出現(xiàn)并迅速上升。表明L1-2組分對柑桔全爪螨三種常見酶系的作用與時間和濃度關系密切，隨著時間的延長和濃度的增大，抑制作用逐漸增強。 牛蒡為常用解表類中草藥，植物資源豐富，其揮發(fā)油被認為是良好的保健食用油，作為植物源農(nóng)藥的來源相對安全。牛蒡含有的9，12-Octadecanoic acid methyl est