1，8-桉油素體外殺螨活性及其作用機(jī)理的研究.pdf

1、桉油為桃金娘科植物藍(lán)按（Eucalyptus globulus Labill.）、樟科植物樟(Cinnamomum camphora(L.) Sieb.)或上述兩科同屬其他植物經(jīng)水蒸氣蒸鎦得到的揮發(fā)油。桉油具有抑菌（真菌和細(xì)菌）、殺蟲(chóng)、鎮(zhèn)痛抗炎、抗氧化和抗癌等藥理活性。1，8-桉油素(1，8-cineole)，又稱(chēng)桉油精，是桉油的主要有效成分，含量為58.55％。為緩解目前抗寄生蟲(chóng)藥物的生物毒性、耐藥性等弊端，尋找新的抗兔疥螨（Sarc

2、optesscabiei var.cuniculi）藥物，本課題對(duì)1，8-桉油素的殺螨活性進(jìn)行測(cè)定，并通過(guò)形態(tài)學(xué)及測(cè)定蟲(chóng)體內(nèi)各種酶活性的變化，初步評(píng)價(jià)1,8-桉油素的殺螨機(jī)理。主要研究結(jié)果如下:
　　1.1,8-棱油素的體外抗疥螨活性測(cè)定:采用離體浸殺的方法，評(píng)價(jià)1，8-桉油素的體外抗疥螨活性并測(cè)定其抗兔疥螨的半數(shù)致死濃度(Lethal Concentration of50％，LC50)幫半數(shù)致死時(shí)間(Lethal Tempera

3、ture of50％，LT50)。結(jié)果顯示:1，8-桉油素在12h的LC50為2.77 mg/mL，當(dāng)1，8-桉油素濃度為9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3 mg/mL時(shí)，其LT50分別為3.606 h、7.416 h、11.296 h。以上結(jié)果表明，1，8-桉油素具有較好的殺螨活性，其作用效果呈現(xiàn)一定的濃度依耐性。
　　2.1，8-桉油素對(duì)兔疥螨形態(tài)學(xué)的影響:用濃度為2.3 mg/mL、4.6 mg/mL、9.2mg

4、/mL的1，8-桉油素處理兔疥螨，在光學(xué)顯微鏡下觀察幼螨的運(yùn)動(dòng)情況，并制作超薄切片，研究藥物對(duì)疥螨蟲(chóng)體超微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果表明:在光學(xué)顯微鏡下，用藥活的開(kāi)始不停地急劇運(yùn)動(dòng)，興奮異常;一段時(shí)間后蟲(chóng)體擴(kuò)散逃逸，發(fā)現(xiàn)大量蟲(chóng)卵;最后蟲(chóng)體收縮變小、死亡。超微電鏡下，正常組蟲(chóng)體皮膚層具有規(guī)律性的條紋，體腔細(xì)胞完整;用藥組蟲(chóng)體皮膚層變得無(wú)規(guī)律，體腔細(xì)胞細(xì)胞膜溶解，線粒體空泡化，細(xì)胞核溶解消失。由此可知，1，8-桉油素可麓主要通過(guò)影響蟲(chóng)體的吞噬系統(tǒng)、能

5、量代謝系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，最終導(dǎo)致蟲(chóng)體死亡。
　　3.1，8-桉油素對(duì)兔疥螨酶活性的影響:以濃度為9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3mg/mL的1，8-桉油素作為實(shí)驗(yàn)組，液體石蠟作為空白對(duì)照組處理兔疥螨，分別在4h、8h和12h采集蟲(chóng)體提取酶原液，分別測(cè)定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione-s-transferases，GSTs)、單胺氧化酶(mo

6、noamine oxidase，MAO)、Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)、乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AchE)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的活性。結(jié)果表明:
　　保護(hù)酶類(lèi)的酶活性的變化:在12h內(nèi)，不同濃度的1，8-桉油素處理疥螨蟲(chóng)體后，蟲(chóng)體的SOD酶活性均升高，其中，1，8-桉油素濃度處理蟲(chóng)體4h時(shí)，SOD升離率最高為43.83％;1，8-桉油素

7、處理蟲(chóng)體12h時(shí)，SOD升高率最低為6.11％。結(jié)果表明1，8-桉油素能夠誘導(dǎo)疥螨蟲(chóng)體SOD活性的升高。
　　防御酶類(lèi)的酶活性的變化:在12h內(nèi)，不同濃度的1，8-桉油素處理疥螨蟲(chóng)體后，蟲(chóng)體麴GSTs酶活性均升高，其中，1，8-按油素處理12h時(shí)GSTs活性升高率最高為684.02％;處理4h時(shí)GSTs活性升高率最低為41.10％。結(jié)果表明1，8-桉油素能夠激活蟲(chóng)體的防御系統(tǒng)，誘導(dǎo)GSTs活性升高，降低1，8-桉油素對(duì)機(jī)體的損傷。

8、
　　神經(jīng)傳遞酶類(lèi)的酶活性的變化:在12 h內(nèi)，不同濃度的1，8-桉油素處理疥螨蟲(chóng)體后，蟲(chóng)體的MAO酶活性均升高，其中1，8-桉油素處理4h時(shí)MAO活性升高率最高為244.73％;處理12 h時(shí)MAO活性升高率最低為17.99％。結(jié)果表明1，8-桉油素能夠升高M(jìn)AO活性，導(dǎo)致神經(jīng)傳遞加快，引起蟲(chóng)體興奮異常。
　　在0～8 h，不同濃度的1，8-桉油素處理疥螨蟲(chóng)體后，蟲(chóng)體的Ca2+-ATPase的活性升高;在12h，蟲(chóng)體的Ca

9、2+-ATPase的活性是被抑制的。結(jié)果表明在1，8-桉油素作用前期，蟲(chóng)體興奮異常，急劇運(yùn)動(dòng)，消耗大量ATP.隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)，蟲(chóng)體逐漸趨于死亡，機(jī)體對(duì)ATP的需求減少，酶活性降低。
　　神經(jīng)效應(yīng)酶類(lèi)的酶活性的變化:在12 h內(nèi)，不同濃度的1，8-桉油素處理疥螨蟲(chóng)體后，蟲(chóng)體的AChE酶活性均被抑制，濃度為9.2 mg/mL時(shí)AChE酶活性抑制率最大為65.52％，濃度為2.3 mg/mL時(shí)抑制率最小為10.87％。結(jié)果表明1

10、，8-桉油素能夠抑制AchE活性，引起蟲(chóng)體突觸間隙乙酰膽堿(Ach)積累，導(dǎo)致蟲(chóng)體持續(xù)興奮，且1，8-桉油素濃度越高，酶活性的抑制率越高。
　　在12h內(nèi)，用不同濃度1，8-桉油素處理兔疥螨，當(dāng)1，8-按油素濃度為9.2 mg/mL時(shí)，NOS的活性被抑制，抑制率最高為52.98％;當(dāng)1，8-桉油素濃度為4.6 mg/mL和2.3 mg/mL時(shí)，NOS的活性升高，升高率最高為269.12％。結(jié)果表明1，8-桉油素對(duì)疥螨NOS活性呈現(xiàn)