心肌肥厚動(dòng)物模型建立方法研究進(jìn)展

1、<p>　　心肌肥厚動(dòng)物模型建立方法研究進(jìn)展 </p><p>　　摘 要  目的： 綜述心肌肥厚 （CH） 動(dòng)物模型的建立方法， 為CH類(lèi)疾病的研究和臨床治療提供參考。方法： 以 “心肌肥厚” “動(dòng)物模型” “Cardiac hypertrophy” “Model” 等組合作為關(guān)鍵詞， 在中國(guó)知網(wǎng)、 PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索相關(guān)文獻(xiàn)， 篩選2004－2014年有關(guān)CH動(dòng)物模型建立方法的內(nèi)容

2、， 綜述常用模型的基本原理、 制備方法及特點(diǎn)等。結(jié)果與結(jié)論： 共查閱到376條文獻(xiàn)， 其中有效文獻(xiàn)29條。目前常用的CH動(dòng)物模型建立方法有物理法 （包括壓力超負(fù)荷法致CH、 容量負(fù)荷法致CH、 心肌梗死致CH、 運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)致CH） 、 化學(xué)法 （包括藥物誘導(dǎo)法致CH） 和生物法 （包括轉(zhuǎn)基因型CH、 自發(fā)性高血壓大鼠模型致CH） 等。其均可模擬CH， 而CH原理、 制備方法和模型特點(diǎn)各異。在CH動(dòng)物模型中， 大鼠易飼養(yǎng)、 經(jīng)濟(jì)、 抗感染力

3、強(qiáng)， 常作為首選造模動(dòng)物， 常用鼠種為SD大鼠及小鼠， 雌雄均可。在現(xiàn)有成模方法中， 壓力超負(fù)荷法制作慢性CH模型， 手術(shù)操作簡(jiǎn)單方便、 重復(fù)性好、 造價(jià)低廉， 最為常用； 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型對(duì)人類(lèi)疾病的模擬程度更高， 但耗時(shí)長(zhǎng)， 費(fèi)用</p><p>　　關(guān)鍵詞 心肌肥厚； 動(dòng)物模型； 建模方法； 轉(zhuǎn)基因</p><p>　　心肌肥厚 （CH） 是心肌細(xì)胞對(duì)多種病理刺激的一種適應(yīng)性反應(yīng)。在早

4、期， CH因心室壁增厚、 心肌收縮功能改善而被視為代償性過(guò)程 [1] ； 但在持久病理性應(yīng)激情況下， CH伴隨間質(zhì)纖維化、 收縮功能失調(diào)以及基因表達(dá)、 能量代謝和電生理特征異常， 最終導(dǎo)致失代償性心功能衰竭， 嚴(yán)重危害人體健康。目前認(rèn)為， CH是心血管疾病的一種常見(jiàn)并發(fā)癥， 已被列為引起心血管疾病發(fā)生率和病死率顯著升高的獨(dú)立危險(xiǎn)因素 [2] 。其發(fā)生機(jī)制復(fù)雜， 至今仍未完全闡明， 而對(duì)CH的發(fā)生機(jī)制及治療方法等研究常用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行， 因

5、此復(fù)制動(dòng)物模型成為目前國(guó)內(nèi)外從事CH研究的常用手段。本文擬以 “心肌肥厚” “動(dòng)物模型” “Cardiac hypertrophy” “Model” 等組合作為關(guān)鍵詞， 在中國(guó)知網(wǎng)、 PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索相關(guān)文獻(xiàn)， 篩選2004－2014年有關(guān)CH動(dòng)物模型建立方法的內(nèi)容。結(jié)果共查閱到376條文獻(xiàn)， 其中有效文獻(xiàn)29條?，F(xiàn)根據(jù)物理法、 化學(xué)法和生物法等基本造模方法， 對(duì)常用CH動(dòng)物模型的基本原理、 制備方法及特點(diǎn)等進(jìn)行綜述， 為CH

6、類(lèi)疾病的研究和臨床治療提供參考。</p><p><b>　　1 物理法</b></p><p>　　物理法是指通過(guò)外界機(jī)械力、 氣壓、 溫度、 光和聲音等條件的改變， 誘發(fā)動(dòng)物形成某一疾病的造模過(guò)程， 主要包括壓力超負(fù)荷法、 容量負(fù)荷法、 心肌梗死致CH和運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)致CH。其中， 前3種均采用手術(shù)方式復(fù)制CH模型， 具有成模時(shí)間短、 操作方便、 重復(fù)性好、 價(jià)格較低等

7、優(yōu)點(diǎn)， 但會(huì)給動(dòng)物造成極大的痛苦； 后者通過(guò)有規(guī)律的運(yùn)動(dòng)復(fù)制CH模型， 能較好地模擬人類(lèi)CH疾病發(fā)展過(guò)程， 但造模時(shí)間較長(zhǎng)、 操作較煩瑣。</p><p>　　1.1 壓力超負(fù)荷法致CH</p><p>　　壓力超負(fù)荷法的機(jī)制為促使大鼠血壓升高或主動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致心臟后負(fù)荷增加， 心臟運(yùn)作耗氧量增加， 心肌內(nèi)交感神經(jīng)末梢去甲腎上腺素釋放增高， 血管緊張素Ⅱ （AngⅡ） 等體液因素參與， 導(dǎo)致

8、其心肌代謝紊亂、 左心室重構(gòu)， 最終產(chǎn)生CH [3] 。</p><p>　　一般可選擇在大鼠升主動(dòng)脈、 主動(dòng)脈弓和腹主動(dòng)脈處進(jìn)行主動(dòng)脈縮窄手術(shù)， 建立壓力超負(fù)荷疾病的動(dòng)物模型。該法具有成模時(shí)間短、 操作方便、 重復(fù)性好、 價(jià)格較低等優(yōu)點(diǎn)， 已成為最常用的一種造模方法， 但大鼠術(shù)后早期死亡率較高 （約20％～30％） ， 據(jù)認(rèn)為與急性心功能不全有關(guān) [4] 。</p><p>　　1.1.

9、1 主動(dòng)脈弓縮窄法 （TAC） 致CH TAC是采用微創(chuàng)方法，</p><p>　　在小鼠無(wú)名動(dòng)脈和左頸總動(dòng)脈之間結(jié)扎主動(dòng)脈弓， 通過(guò)構(gòu)建不同程度的主動(dòng)脈弓縮窄， 造成中度或重度左心室流出通路機(jī)械梗阻， 4周后可形成較明顯的左心室CH。采用該法構(gòu)建不同程度的主動(dòng)脈縮窄模型， 具有重復(fù)性好、 效果確切、 術(shù)后小鼠存活率高等特點(diǎn)， 是一種值得推薦的方法 [5] 。</p><p>　　1.1.

10、2 升主動(dòng)脈縮窄法致CH 該法系將SD大鼠麻醉后， 行氣管插管， 并用呼吸機(jī)進(jìn)行輔助呼吸 [6] 。具體做法是： 取大鼠左胸前外切口， 于第2～3肋間無(wú)菌操作下開(kāi)胸， 用開(kāi)胸器撐開(kāi)切口， 暴露升主動(dòng)脈， 將主動(dòng)脈結(jié)扎于8號(hào)針頭上， 隨后將針頭退出即可。造模10周后超聲心動(dòng)圖檢測(cè)顯示， 大鼠左心室呈典型的向心性肥厚病理改變。該法逐漸增加的后負(fù)荷與臨床心力衰竭的演變過(guò)程更為接近， 因此適于CH-心力衰竭轉(zhuǎn)變機(jī)制的研究， 可為藥物干預(yù)逆轉(zhuǎn)CH

11、、 心力衰竭及基因治療提供理想的研究對(duì)象。</p><p>　　1.1.3 腹主動(dòng)脈縮窄法致CH 國(guó)外學(xué)者 [7-8] 采用SD大鼠， 在略高于右腎動(dòng)脈處進(jìn)行腹主動(dòng)脈暴露及分離， 并結(jié)扎在8號(hào)針頭上， 結(jié)扎后退出針頭。術(shù)后飼養(yǎng)， 經(jīng)過(guò)超聲心動(dòng)圖檢測(cè)， 發(fā)現(xiàn)在第4周末舒張期室壁厚度明顯增加， 表明造模成功。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈狹窄高血壓CH模型進(jìn)行了優(yōu)化， 對(duì)雄性Wistar大鼠腹腔麻醉后， 在腹左側(cè)左肋弓下緣0

12、.5 cm、 脊柱前0.5 cm處行1.5～2.0 cm縱切口， 結(jié)扎在8號(hào)針頭上， 結(jié)扎后退出針頭。術(shù)后4周大鼠心臟系數(shù)和心肌肥大指數(shù)已增大， 病理切片顯示心肌細(xì)胞肥大。既往的腹正中切口術(shù)式， 手術(shù)切口長(zhǎng)3～4 cm， 需撥開(kāi)胃腸等內(nèi)臟器官顯露后腹膜， 破壞后腹膜方能暴露腹主動(dòng)脈， 術(shù)式創(chuàng)傷性較大， 易造成腹腔感染。而手術(shù)切口的優(yōu)化避免了傳統(tǒng)的正中切口或左側(cè)斜切口術(shù)式， 減少了動(dòng)物的損傷， 使動(dòng)物存活率提高，手術(shù)難度也減小 [9] 。

13、</p><p>　　1.1.4 腎性高血壓大鼠致CH 黃幀檜等 [10] 選用雄性SD大鼠，</p><p>　　以25％烏拉坦3 ml/kg腹腔注射麻醉后， 分離大鼠的左腎動(dòng)脈， 放置內(nèi)徑為0.2 mm的銀夾并固定， 術(shù)后4周經(jīng)檢測(cè)造模成功。腎性高血壓大鼠造模是對(duì)大鼠腎動(dòng)脈縮窄， 造成腎臟缺血， 使腎內(nèi)產(chǎn)生腎素， 增加血內(nèi)的AngⅡ含量， 致使高血壓形成、 長(zhǎng)期刺激而產(chǎn)生CH。其優(yōu)點(diǎn)在

14、于和人類(lèi)的病理模型相近， CH逐漸形成， 高血壓較穩(wěn)定， 形成CH模型也不太困難， 因此常被用作研究模型。腎性高血壓大鼠模型在腎動(dòng)脈狹窄時(shí)應(yīng)注意腎動(dòng)脈狹窄的程度， 松緊度應(yīng)適宜： 過(guò)松則血壓不會(huì)升高， 導(dǎo)致CH不能形成； 過(guò)緊則會(huì)造成腎臟壞死， 也不能形成CH。因此， 使血流量減少原水平的50％～70％較為合適。</p><p>　　1.2 容量負(fù)荷法致CH</p><p>　　容量負(fù)荷法

15、是持續(xù)增加動(dòng)物心室內(nèi)血容量， 容量超負(fù)荷一般出現(xiàn)在患有二尖瓣返流、 主動(dòng)脈返流、 動(dòng)靜脈畸形和其他一些先天性心臟病的動(dòng)物體內(nèi)。出現(xiàn)以上狀況時(shí)， 心臟須增大壓力將一定量的血液泵出和對(duì)抗血液的返流壓力。隨著前負(fù)荷的增加， 長(zhǎng)時(shí)間刺激就會(huì)導(dǎo)致心臟舒張末期容量增加， 最終引發(fā)CH。</p><p>　　1.2.1 動(dòng)靜脈造瘺法 （ACF） 致CH ACF通過(guò)造成動(dòng)物動(dòng)靜</p><p>　　脈短路

16、， 使回心血量增加， 導(dǎo)致血流動(dòng)力學(xué)過(guò)載引起右心室肥大。此方法一般采用大鼠腹部正中切口后， 于腎動(dòng)脈下分離出腹主動(dòng)脈和下腔靜脈， 用血管夾分別夾在腎動(dòng)脈起始部下方約2～3 mm和腹主動(dòng)脈分叉處， 阻斷動(dòng)、 靜脈血流。用9號(hào)靜脈注射針斜向上刺穿下腔靜脈壁， 繼續(xù)刺穿動(dòng)靜脈聯(lián)合壁，鮮紅色血液流出。退針后， 用9～0無(wú)損傷縫線縫合靜脈壁創(chuàng)口。松開(kāi)血管夾， 下腔靜脈變紅， 證明造瘺成功 [11] ， 4～5周即形成CH模型。Cantor EJ等

17、 [12] 采用此模型進(jìn)行了壓力超負(fù)荷與容量超負(fù)荷相關(guān)性比較， 結(jié)果表明壓力超負(fù)荷與容量超負(fù)荷都會(huì)對(duì)CH產(chǎn)生代償性的調(diào)節(jié)作用， 但其所引起的心臟結(jié)構(gòu)與功能變化有所差異。</p><p>　　1.2.2 二尖瓣返流 （MR） 致CH MR常用犬或羊作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物， 通過(guò)斷裂動(dòng)物瓣膜上的腱索來(lái)破壞二尖瓣。腱索斷裂可采用胸內(nèi)或開(kāi)胸技術(shù)來(lái)完成。在胸內(nèi)模型中， 需借助超聲定</p><p>　　位，

18、用心肌活檢鉗鉗夾二尖瓣前葉緣上一條腱索， 并將其咬斷， 術(shù)后飼養(yǎng)待模型形成。在開(kāi)胸模型中， 需將正中胸骨切開(kāi)， 切除心包， 然后可通過(guò)切開(kāi)心房或用金屬器械插入左心室心尖來(lái)破壞腱索使二尖瓣關(guān)閉不全。有報(bào)道稱(chēng)， 選用雜種健康犬MR之后， 因腎上腺素和去甲腎上腺素等神經(jīng)體液分泌釋放到心肌細(xì)胞間液中， 4周后可觀察到左心室舒張末期的內(nèi)徑和收縮指數(shù)明顯增加 [13] 。MR造模成型時(shí)間較長(zhǎng)、 成本較高，而且動(dòng)物的死亡率和并發(fā)癥發(fā)生率均較高 [14

19、] 。</p><p>　　1.3 心肌梗死致CH</p><p>　　心肌梗死致CH常采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎、 堵塞冠狀動(dòng)脈或促進(jìn)冠狀動(dòng)脈血栓形成等方法阻斷冠狀動(dòng)脈血流， 使相應(yīng)供血部位心肌發(fā)生缺血壞死； 非缺血區(qū)心室肌由于心室內(nèi)壓增高，心室壁牽張力增加， 同時(shí)心肌局部和循環(huán)腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活以及心臟交感張力提高等導(dǎo)致CH。冠狀動(dòng)脈有利于定位、 定性、 定量， 有利于形態(tài)、 功能、 化學(xué)

20、等指標(biāo)觀測(cè)動(dòng)態(tài)研究， 是目前應(yīng)用比較廣泛的心肌梗死致CH模型研究方法。選取SD大鼠， 麻醉開(kāi)胸后， 在其左心耳下2 mm處結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支， 逐層關(guān)胸， 術(shù)后飼養(yǎng)。Henderson KK等 [15] 報(bào)道， 左前降支結(jié)扎后1周即可形成CH。該實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵在于要注意結(jié)扎的位置及梗死的程度， 需要一定的操作技巧與熟練度。</p><p>　　1.4 運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)致CH</p><p>　　運(yùn)動(dòng)誘

21、導(dǎo)是通過(guò)使動(dòng)物進(jìn)行有規(guī)律的有氧訓(xùn)練來(lái)增強(qiáng)其心臟功能并誘導(dǎo)CH。目前已運(yùn)用的有跑臺(tái)訓(xùn)練、 跑輪訓(xùn)練和游泳訓(xùn)練法。其均由長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)、 全身血流需求增加、 心臟泵血能力得到鍛煉和提高、 心肌耗氧量增加、 代償性增大射血量、心肌增大以提高泵血能力， 最終導(dǎo)致CH。</p><p>　　1.4.1 跑臺(tái)訓(xùn)練致CH 研究表明，小鼠在跑臺(tái)上進(jìn)行持續(xù)的強(qiáng)烈運(yùn)動(dòng)并不能形成明顯的CH，這可能是持續(xù)的強(qiáng)烈運(yùn)動(dòng)使其運(yùn)動(dòng)能力得到提高，導(dǎo)致運(yùn)

22、動(dòng)訓(xùn)練中壓力負(fù)荷減小的緣故 [16] 。</p><p>　　Kem OJ等 [17] 將小鼠放在跑臺(tái)上進(jìn)行有氧間斷性訓(xùn)練， 第4周即形成CH， 其左心室和右心室體積增加25％～35％， 7～13周后心肌直徑增加15％。</p><p>　　1.4.2 跑輪訓(xùn)練致CH 跑輪訓(xùn)練是在跑輪上施加適量的阻力， 讓大鼠在跑輪上自主訓(xùn)練， 無(wú)外界刺激與干擾。跑輪訓(xùn)練在2～4周跑步距離達(dá)到高峰， 為1

23、0～15 km/d； 此后降低至＜4km/d。依照此方法， 完全的CH可在3～4周被觀察到 [18] 。</p><p>　　1.4.3 游泳訓(xùn)練致CH 將大鼠放入水箱， 讓其負(fù)荷游泳， 游泳時(shí)間無(wú)固定標(biāo)準(zhǔn)。研究顯示， 進(jìn)行每周5 d、 200 m/d、 共12周的訓(xùn)練， 能觀察到明顯的CH現(xiàn)象 [19] 。國(guó)內(nèi)學(xué)者 [20] 使用類(lèi)似方法， 選用SD大鼠， 每日使其游泳2次、 1 h/次、 每周5 d、 共8周

24、，結(jié)果可見(jiàn)顯著的CH發(fā)生。</p><p>　　運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)法是由耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練誘導(dǎo)的生理性CH和重構(gòu)，被認(rèn)為對(duì)心功能是有益的 [21] 。在誘導(dǎo)CH中， 同樣伴隨心肌細(xì)胞體積的增大和新生肌小節(jié)的形成， 但很少出現(xiàn)心肌纖維化、細(xì)胞壞死和凋亡， 并不會(huì)失代償或轉(zhuǎn)變?yōu)樾牧λソ摺?lt;/p><p><b>　　2 化學(xué)法</b></p><p>　　化學(xué)法是

25、使用各種化學(xué)試劑或藥物對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生直接或間接 （通過(guò)代謝產(chǎn)物） 作用， 由此誘發(fā)動(dòng)物疾病模型?；瘜W(xué)法誘發(fā)CH主要為藥物誘導(dǎo)法， 具有操作簡(jiǎn)單、 耗時(shí)少、 形成快、 心肌病變明顯、 動(dòng)物死亡率低的優(yōu)勢(shì)， 并能模擬機(jī)體腎上腺素分泌量增加導(dǎo)致CH的病理過(guò)程。</p><p>　　具體來(lái)說(shuō)， 藥物誘導(dǎo)主要通過(guò)注射給藥或植入滲透泵等方式， 持續(xù)性地給予某種藥物， 使受試動(dòng)物在藥物的持續(xù)刺激下誘發(fā)CH。其機(jī)制是通過(guò)激活動(dòng)物

26、腎上腺素促進(jìn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和多種神經(jīng)內(nèi)分泌激素的形成， 如去甲腎上腺素 （NE） 、 異丙腎上腺素 （ISO） 等兒茶酚胺類(lèi)能激動(dòng)α、 β受體， 刺激心肌細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白DNA的合成， 促進(jìn)蛋白合成、 膠原沉著、 心肌纖維化， 最后出現(xiàn)CH。</p><p>　　白崇峰等 [22] 選用SD大鼠， 采取腹腔注射去甲腎上腺素1.5 mg/kg、 每日2次、 持續(xù)28 d形成CH模型； Chowdhury D等 [23]

27、以ISO皮下注射、 5 mg/kg、 1 次/d、 14 d得到SD大鼠CH模型；Takeshita D 等 [24] 利用皮下植入 ISO 滲透泵方式， 考察了 1.2mg/ （kg · d） 、 3 d和1.2 mg/ （kg · d） 、 7 d不同劑量的ISO對(duì)CH的影響， 結(jié)果顯示3 d和7 d不同ISO劑量誘導(dǎo)的CH形狀和功能無(wú)顯著性差異， 3 d的ISO劑量足以誘發(fā)CH。</p><

28、p><b>　　3 生物法</b></p><p>　　生物法主要指通過(guò)動(dòng)物自身的遺傳因素和轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得某種疾病模型的方法。該法復(fù)制CH模型主要有自發(fā)性高血壓大鼠 （SHR） 模型和轉(zhuǎn)基因CH動(dòng)物模型。</p><p><b>　　3.1 SHR模型</b></p><p>　　SHR多由基因遺傳決定。SHR大鼠在

29、出生后， 血壓隨著鼠齡的增長(zhǎng)而不斷升高， 4周齡時(shí)大鼠的心肌質(zhì)量即開(kāi)始增加， 3～4個(gè)月時(shí)血壓即已穩(wěn)定升高， CH亦加重， SHR CH以左心室肥厚為主， 但亦可能伴發(fā)肺動(dòng)脈高壓及右心室肥厚。有研究表明， SHR大鼠至14周齡時(shí)會(huì)出現(xiàn)明顯的左心室肥厚， 24周時(shí)進(jìn)一步加劇， 但差異并不明顯 [25] 。Rysa J等 [26] 通過(guò)對(duì)SHR大鼠基因表達(dá)的觀察， 發(fā)現(xiàn)編碼細(xì)胞外基質(zhì)蛋白基因表達(dá)的增加與CH的發(fā)展有一定聯(lián)系。</p&g

30、t;<p>　　3.2 轉(zhuǎn)基因型CH</p><p>　　轉(zhuǎn)基因動(dòng)物維持著遺傳背景的高度真實(shí)， 故通過(guò)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究得出的結(jié)論具有其他實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)所不具備的真實(shí)性；同時(shí)， 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物也是新的治療方法研究體系和新的藥物篩選系統(tǒng)。轉(zhuǎn)基因型CH模型的建立為CH等心血管疾病的研究提供了更新、 更全面的舞臺(tái)。</p><p>　　3.2.1 肌球蛋白突變模型 肌球蛋白由2條重鏈 （MHC）

31、 和2條輕鏈 （MLC） 組成， MHC分α、 β 2種亞型。小鼠α-MHC基因第403密碼子產(chǎn)生錯(cuò)義突變， 即R403Q。小鼠模型表現(xiàn)為肌細(xì)胞排列紊亂、 纖維化、 心臟功能障礙， 且雌性的病理變化比雄性更顯著， CH局限于左心房。R403Q是首個(gè)發(fā)現(xiàn)的與家族性心肌病 （FHC） 相關(guān)的突變基因。Lowey S等 [27] 研究顯示， 在小鼠α-MHC和β-MHC中R403Q突變將對(duì)CH產(chǎn)生相反的作用：小鼠α-MHC中R403Q突變使小

32、鼠肌動(dòng)蛋白絲滑行速度增加，而β-MHC中R403Q突變的小鼠肌動(dòng)蛋白絲滑行速度下降。</p><p>　　3.2.2 肌球蛋白結(jié)合蛋白C （MYBPC） 突變模型 MYBPC突變可導(dǎo)致CH， 突變類(lèi)型為插入、 缺失或剪接位點(diǎn)突變， 導(dǎo)致肌球蛋白和肌聯(lián)蛋白結(jié)合位點(diǎn)缺少。Cheng Y等 [28] 通過(guò)基因敲除技術(shù)， 將小鼠心肌上MYBPC基因敲除， 導(dǎo)致肌小節(jié)收縮功能障礙和結(jié)構(gòu)破壞， 從而影響小鼠心肌收縮與心室結(jié)構(gòu)

33、改變，證實(shí)MYBPC基因敲除會(huì)影響心肌收縮和心室重構(gòu)， 誘發(fā)代償性心肌肥大。</p><p>　　3.2.3 肌鈣蛋白T突變模型 董偉等 [29] 用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增人心肌肌鈣蛋白T （cTnT） 全長(zhǎng)互補(bǔ)DNA （cDNA） ， 用點(diǎn)突變方法使cDNA在275堿基產(chǎn)生G→A的突變， 編碼的氨基酸由精氨酸 （Arg） 突變?yōu)楣劝滨０?（Gln） ， 將cTnT R92Q （cTnT基因第92密碼子產(chǎn)生錯(cuò)義

34、突變， 即R92Q） 基因克隆入小鼠心臟特異表達(dá)的α-MHC的下游構(gòu)建cTnT R92Q轉(zhuǎn)基因載體。然后， 用顯微注射法將線性化的轉(zhuǎn)基因載體注射到C57BL/6J （小鼠品系， 純系） 小鼠的受精卵中。待小鼠出生后9月齡cTnTR92Q轉(zhuǎn)基因小鼠的心臟進(jìn)行病理解剖， 觀察到cTnT R92Q轉(zhuǎn)基因小鼠的心臟明顯大于同窩陰性小鼠， 表明CH造模成功。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型在分子、 細(xì)胞和整體水平上有機(jī)結(jié)合起來(lái)， 為研究人類(lèi)疾病、 揭示各個(gè)基因的各

35、種功能起到了重大作用； 而且， 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的建立為人類(lèi)疾病的深入研究開(kāi)辟了新的思路， 有助于認(rèn)識(shí)疾病的本質(zhì)、 確定治療方案及藥物開(kāi)發(fā)。但同時(shí)， 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型研究耗時(shí)較長(zhǎng)、 費(fèi)用昂貴， 因而受到了一定限制。</p><p><b>　　4 結(jié)語(yǔ)</b></p><p>　　近年來(lái)， 國(guó)內(nèi)外學(xué)者采用物理、 化學(xué)、 生物等方法建立的各種CH動(dòng)物模型， 均能較好地模擬人

36、類(lèi)心肌疾病的發(fā)病過(guò)程， 并隨著研究不斷深入， 實(shí)驗(yàn)的成功率、 仿真度等都在逐漸提高。在這些模型中， 目前使用最廣的是通過(guò)部分縮窄主動(dòng)脈這一經(jīng)典的造模方法， 是目前研究CH較為理想的模型。此外， 轉(zhuǎn)基因CH小鼠也逐漸參與到CH疾病研究的過(guò)程中來(lái)， 為研究CH提供了一種新的工具， 并且在分子水平更深的層次上實(shí)現(xiàn)CH疾病模型的復(fù)制， 突破了傳統(tǒng)造模方式受外界因素的干擾。轉(zhuǎn)基因CH小鼠模型的建立在其功能及與疾病關(guān)系的研究中具有廣闊的應(yīng)用前景。筆

37、者相信， 隨著人類(lèi)對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)理論與實(shí)踐研究的深入， 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型可能將會(huì)成為未來(lái)發(fā)展的方向。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[ 1 ] Yang FY， Liu Z， Wang YJ， et al. Hydrogen sulfide endo-thelin-induced myocardial hypertrophy in ra

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