肝臟血流控制優(yōu)化方法的動(dòng)物模型建立與其機(jī)制.pdf

1、背景：
　　19世紀(jì)的末期，醫(yī)學(xué)工作者通過(guò)反復(fù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與研究，基本確立肝實(shí)質(zhì)切開(kāi)是可行的，切除后的余肝可以再生以并可達(dá)到其原來(lái)的體積[1]，因肝臟血運(yùn)豐富，血管分布復(fù)雜，行肝臟切除術(shù)時(shí)總會(huì)伴隨著大量出血手術(shù)成功率很低。直到1908年P(guān)ringle提出肝切除時(shí)暫時(shí)阻斷肝蒂的入肝血流阻斷方法突破了很多制約肝臟外科手術(shù)的不利因素。經(jīng)過(guò)100多年來(lái)的臨床實(shí)踐證明，Pringle法簡(jiǎn)便、實(shí)用，幾乎可用于各種類(lèi)型的肝切除術(shù)，但對(duì)一些特殊部位

2、腫瘤的手術(shù)切除，因術(shù)中顯露困難增加了手術(shù)難度與時(shí)間，術(shù)中術(shù)后會(huì)出現(xiàn)大出血和肝功能衰竭等并發(fā)癥，手術(shù)死亡率明顯增高[2]。如何探索出一種最大限度減少肝臟缺血再灌注損傷，使全身炎性反應(yīng)更輕，更好的保護(hù)術(shù)后剩余肝臟功能的血流阻斷方法，一直是肝膽外科學(xué)研究的熱點(diǎn)[3]。
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)根據(jù)大鼠肝臟存在兩套血供系統(tǒng)，即肝動(dòng)脈與門(mén)靜脈，其解剖結(jié)構(gòu)與人類(lèi)相似，開(kāi)展優(yōu)化入肝血流控制方法的實(shí)驗(yàn)研究[4-5]。
　　方法：

3、　　1.設(shè)計(jì)出大鼠肝臟熱缺再灌注損傷模型，隨機(jī)分為四組:實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，Pringle法組、半肝阻斷血流阻斷法組及尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈組。觀察不同阻斷方法下肝缺血再灌注24 h及7天實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活率、肝斷面出血量、肝組織內(nèi)血流灌注壓及門(mén)靜脈壓力變化，結(jié)合病理學(xué)、血清酶學(xué)等常規(guī)方法，篩選出一種優(yōu)化的肝門(mén)血流控制方式。
　　2.在手術(shù)前12小時(shí)，讓大鼠充分適應(yīng)外界環(huán)境，手術(shù)前禁食，對(duì)飲水不受限制。
　　3.動(dòng)物麻醉:采用腹腔內(nèi)

4、注射10％水合氯醛進(jìn)行麻醉，術(shù)中間斷給以乙醚吸入使其一直處于麻醉狀態(tài)。
　　4.手術(shù)步驟:將處于麻醉狀態(tài)下的Wistar大鼠仰臥位固定在自制手術(shù)操作臺(tái)上，采取上腹部正中切口進(jìn)入腹腔，用棉簽鈍性剝離肝臟下緣組織，將胃腸撥向左側(cè)，充分顯露第一肝門(mén)。尖端肝周?chē)g帶，仔細(xì)分離出擬阻斷的肝臟血管。
　　(1)對(duì)照組:開(kāi)腹后進(jìn)行肝臟周?chē)g帶的游離，成完成灌注壓及門(mén)靜脈壓測(cè)定后，結(jié)扎肝左葉通道，切除肝左葉用于病理學(xué)檢查，于肝中葉邊緣做一切

5、長(zhǎng)約0.5cm的切口，在切口上放置無(wú)菌棉球收集出血，時(shí)間設(shè)定為2分鐘，收集完畢后斷頭處死。
　　(2) Pringle法組:游離出門(mén)靜脈與肝固有動(dòng)脈后用血管夾阻斷連同膽管一同夾閉造成整個(gè)入肝血流阻斷。
　　(3)半肝血流阻斷組:用無(wú)損傷血管夾阻斷肝門(mén)部將入肝中葉與左葉的管道阻斷造成70％肝臟缺血。
　　(4)尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈組:用兩個(gè)無(wú)損傷血管夾分別阻斷肝中葉與肝左葉的門(mén)靜脈通道，保留動(dòng)脈血流與尾葉血供。<

6、br>　　(5)各組在阻斷到30分鐘后松開(kāi)血管夾，復(fù)流30分鐘后，切除肝左葉。認(rèn)真止血檢查無(wú)明顯出血后逐層縫合進(jìn)行關(guān)腹。
　　5.觀察不同阻斷方式下對(duì)肝創(chuàng)面出血的控制。
　　6.Wistar大鼠開(kāi)腹后進(jìn)行手術(shù)操作，不同肝臟血流阻斷方法下每組需保證15只大鼠存活，通過(guò)使用大鼠數(shù)量計(jì)算了手術(shù)成功率，觀察手術(shù)成功后大鼠不同阻斷方法下大鼠24小時(shí)、7天存活率。
　　7.病理學(xué)檢查:手術(shù)完成后切除部分肝臟，行肝組織切片做HE染色

7、，觀察鏡下肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　8.Wistar大鼠進(jìn)行斷尾進(jìn)行血液標(biāo)本采集進(jìn)行對(duì)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)數(shù)值檢測(cè)。
　　9.檢測(cè)肝組織內(nèi)灌注壓及門(mén)靜脈內(nèi)壓力的變化。
　　10.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用單因素方差分析，兩組均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.成功完成Pri

8、ngle法組、半肝血流阻斷組與尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈組的動(dòng)物模型建立;
　　2.Pringle法組、半肝血流阻斷組與尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈組三種阻斷肝門(mén)血流控制法阻斷肝臟血流后，肝斷面仍然有一定的出血量，肝臟斷面出血量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05）。
　　3.手術(shù)成功率:正常對(duì)照組100％(15/15)、Pringle法組88.2％(15/17)、半肝血流阻斷組71.4％(15/21)、尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈

9、組83.3％(15/18)。
　　4.Pringle法組術(shù)后第7天僅2只存活率為13.3％;半肝阻斷法組術(shù)后第7天僅存6只存活率為40.0％;尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈法組術(shù)后7天有8只存活，活率為53.3％。
　　5.病理切片結(jié)果:三者鏡下均見(jiàn)點(diǎn)狀或小灶狀肝細(xì)胞壞死，半肝血流阻斷組與尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈組肝細(xì)胞受損率較Pringle法組明顯輕。
　　6.三組動(dòng)物模型在復(fù)流后1小時(shí)、24小時(shí)后對(duì)肝功能進(jìn)行測(cè)定

10、，結(jié)果表明半肝血流阻斷組與尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈組對(duì)肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力影響明顯較Pringle法組輕。
　　7.Pringle法組阻斷后肝內(nèi)灌注壓會(huì)突然上升至正常水平的3.4倍。
　　結(jié)論：
　　本次研究表明尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈法較Pringle法與半肝血流阻斷法相比有著明顯優(yōu)勢(shì)，能有效減輕肝臟因缺血缺血再灌注造成的損傷，尾狀葉分流保留動(dòng)脈阻斷門(mén)靜脈法是值得在臨床應(yīng)用的一