環(huán)丙沙星對嗜熱鏈球菌grx02生理功能和蛋白表達的影響研究.pdf

1、由于動物性食品原料（如乳、肉等）中抗生素殘留現象較普遍。所以當含有低濃度抗生素的動物性原料用于生產發(fā)酵食品時，發(fā)酵菌株就會受到低濃度抗生素的應激作用。同樣，人們在生病使用抗生素治療過程中，體內的益生菌以及外源補充的益生菌也會受到抗生素的脅迫作用。在低濃度的抗生素作用下，益生菌會產生一定的生理學效應以防止有害物質侵入細胞內，其代謝途徑也會發(fā)生相應的變化。此時是否會有有害的代謝產物產生，會對發(fā)酵產品的品質產生怎樣的影響，目前還未見報道。因此

2、，本文研究了微量環(huán)丙沙星對Streptococcusthermophilusgrx02生理功能和蛋白組表達的影響，從而為進一步研究乳酸菌對藥物應激的機制提供參考，為人類科學合理食用益生菌產品提供理論依據。
　　 (1)本研究利用兩倍稀釋法測定了環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的最低抑菌濃度(MIC)為3.89μg/mL，說明S.thermophilusgrx02對環(huán)丙沙星中度敏感。
　　 (2)通過對不同

3、濃度的微量環(huán)丙沙星應激處理后的菌體進行了微觀形態(tài)學觀察。發(fā)現在光學顯微鏡下對照組和不同亞抑菌濃度環(huán)丙沙星作用下S.thermophilusgrx02的菌落形態(tài)均呈現長鏈狀，沒有發(fā)生明顯的變化。說明在光學顯微鏡下觀察到微量環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的整體菌落形態(tài)并無影響。在透射電鏡下，對照組的細菌呈橢圓形，而環(huán)丙沙星應激下的菌體長度明顯變短，藥物濃度越高半橢圓形越明顯。對照組的莢膜厚而松散，隨著藥物濃度的升高，S.t

4、hermophilusgrx02莢膜明顯變薄且致密，將細胞緊緊包裹住。說明在透射電子顯微鏡下觀察到微量環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的細胞形態(tài)和莢膜影響較大。
　　 (3)通過對不同濃度微量環(huán)丙沙星應激處理后的菌體進行了生長與發(fā)酵特性比較。發(fā)現對照組、1/10MIC和1/50MIC在6h時進入對數生長期，而1/2MIC的在8h時后才進入對數生長期。細菌生長速率和產酸速率分別降低了24.89％和53.29％。說明

5、微量環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的生長和產酸產生了顯著影響。
　　 (4)通過對不同濃度微量環(huán)丙沙星應激處理后的發(fā)酵乳和對照組比較，發(fā)現發(fā)酵乳的pH值、滴定酸度和硬度的變化不顯著，說明抗生素殘留對發(fā)酵乳的pH值、滴定酸度和硬度無顯著影響。藥物組發(fā)酵乳的黏度在(5037.3-5302.0)Pa·s與對照組(6032Pa·s)相比顯著降低。藥物組脫水收縮性為39.40％-44.33％，與對照組(22.46％)相比

6、顯著升高。說明抗生素殘留能使發(fā)酵乳的穩(wěn)定性降低。
　　 (5)通過對不同濃度微量環(huán)丙沙星應激處理后的發(fā)酵乳和對照組比較，發(fā)現1/10MIC組發(fā)酵乳有少量乳清析出，稠厚感不強，其組織狀態(tài)得分顯著低于其他組，且感官鑒定總分84.1±1.5顯著低于其他組;1/30MIC組的感官鑒定總分為88.5±1.7顯著高于1/10MIC組但顯著低于對照組（90.1±1.6）和1/50MIC組（90.2±1.2）;1/50MIC組的感官鑒定總分與對

7、照組無顯著性差異。說明環(huán)丙沙星殘留量較高時，會對S.thermophilusgrx02發(fā)酵乳的感官質量產生顯著影響，而當濃度較低時，對S.thermophilusgrx02發(fā)酵乳的感官質量影響不顯著。
　　 (6)通過利用GC-MS對不同濃度微量環(huán)丙沙星應激下的發(fā)酵乳中揮發(fā)性風味物質進行測定。發(fā)現發(fā)酵乳中揮發(fā)性風味物質的總質量分數明顯降低，尤其是雙乙酰類風味物質的總質量分數明顯降低，且主要風味物質2，3-丁二酮的質量分數也明顯降

8、低。
　　 (7)通過利用液氮研磨—TCA/丙酮—尿素/硫脲/TBP裂解提取法制備S.thermophilusgrx02菌體蛋白質，利用此法制備的S.thermophilusgrx02蛋白質樣品進行雙向電泳，可獲得分離效果良好、重復性好和分辨率高的S.thermophilusgrx02雙向電泳圖譜，共檢測到298±7個蛋白點，適合于后續(xù)的質譜及差異蛋白質質組的分析。
　　 (8)通過使用優(yōu)化的雙向電泳體系對對照組和1/2