內(nèi)蒙古絨山羊皮膚干細胞定位的初步研究.pdf

1、本論文旨在探討B(tài)rdU標記內(nèi)蒙古絨山羊皮膚組織的可行性及免疫組織化學檢測的最優(yōu)條件，并對皮膚干細胞的分布位置、遷移軌跡進行初步研究。通過對絨山羊頸部靜脈注射不同劑量BrdU，活體取背部皮樣，經(jīng)4％多聚甲醛固定，石蠟包埋切片，免疫組織化學技術檢測不同的BrdU注射劑量、二抗及鏈霉菌抗生物素—過氧化物酶濃度、抗原修復方式、DNA變性溫度對BrdU標記結果的影響，以尋求檢測的最佳條件。同時，根據(jù)干細胞的標記滯留性，觀察BrdU標記在皮膚中的分

2、布位置。選擇BrdU標記滯留期的絨山羊背部皮樣，對標記物集中分布的部位進行體外分離培養(yǎng)，并對同期皮膚組織進行干細胞表面標志P63的鑒定。結果表明： 實驗組山羊皮膚組織中有紅色的BrdU陽性細胞的分布，其以PBS代替一抗的陰性對照以及未注射BrdU的空白對照山羊皮膚組織中無BrdU陽性細胞出現(xiàn)。不同BrdU標記劑量對免疫組織化學染色效果無明顯區(qū)別；當2M HCl37℃變性30min，胰蛋白酶37℃修復30min，生物素標記的第二抗

3、體和鏈霉菌抗生物素—過氧化物酶的稀釋度為1：100時，免疫組化檢測結果最理想。 BrdU可以用于內(nèi)蒙古絨山羊短時期的體內(nèi)標記，在本實驗中，標記存留時間為10周。標記滯留細胞存在于初級毛囊、次級毛囊以及表皮基底層，并且主要集中分布在毛球部以及外根鞘，并發(fā)現(xiàn)標記滯留細胞有向上遷移的現(xiàn)象。 在此基礎上，取BrdU標記的絨山羊背頸部皮膚，用酶消化法和機械法分離完整毛囊，對毛球部及外根鞘的細胞進行體外分離、Ⅳ型膠原黏附篩選，經(jīng)培