影響MP1和GMPR2基因在遼寧絨山羊皮膚中表達的研究.pdf

1、本實驗旨在研究調(diào)控MP1與GMPR2基因在皮膚中表達的影響因素與機制，希望以此了解毛囊細胞的形成與周期發(fā)育，對進一步選育遼寧絨山羊提供建設(shè)性意見及幫助。首先制備Noggin基因的RNA干擾載體并且感染羊皮膚傳代細胞，然后利用成纖維細胞生長因子和類胰島素細胞生長因子與褪黑激素既單獨又聯(lián)合處理羊皮膚細胞，最后通過Thermal Cycler DiceTM System Software計算分析出MP1和GMPR2基因的相對表達量。
　

2、　實驗結(jié)果如下:(1)慢病毒的最佳MOI值為30，并且需要添加polybrene助染劑增強感染效率。(2)成功構(gòu)建Lenti-Noggin-EGFP-miR慢病毒后，經(jīng)過計算滴度為1.35×106Tu/ml。(3) GMPR2基因在Noggin干擾組的相對表達量最低，而在陰性對照組中最高。(4)褪黑激素處理羊成纖維細胞結(jié)果顯示，MP1基因的表達被抑制，但隨著藥物處理時間的延長，抑制效果被削弱。(5) FGF5處理羊成纖維細胞時，MP1與

3、GMPR2基因在分時段表達差異非常顯著，其中24小時10-6g/L和48小時10-5g/L分別出現(xiàn)最大值。(6) IGF-1處理羊成纖維細胞，目的基因MP1隨著藥物處理時間延長，濃度降低，基因表達的抑制程度逐漸降低，而GMPR2基因在10-4g/L72小時出現(xiàn)最大值。(7)協(xié)同實驗證明褪黑激素與任何一種外源蛋白聯(lián)合使用均可以促進兩種基因的表達，其中與FGF5協(xié)同作用效果更顯著。
　　結(jié)論:(1) BMP信號通路負調(diào)控GMPR2基因