應(yīng)用SCGE和RAPD技術(shù)檢測石油烴對糞海膽DNA的損傷效應(yīng).pdf

1、現(xiàn)今國內(nèi)外溢油事故頻發(fā),泄漏的石油對海洋生態(tài)環(huán)境造成了嚴重的污染。本文以馬糞海膽為試驗對象,利用單細胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)和隨機擴增多態(tài)性DNA標(biāo)記技術(shù)(RAPD)檢測石油烴對其DNA的損傷效應(yīng),分別從細胞水平和分子水平研究石油烴對海洋生物的毒性效應(yīng),探討這兩種技術(shù)在海洋石油烴污染檢測中的可行性,為海洋生態(tài)環(huán)境污染早期預(yù)警與風(fēng)險評價提供參考。
　　 以0#柴油梯度濃度和暴露天數(shù)為變量條件,利用SCGE技術(shù),在細胞水平上研究石

2、油烴對馬糞海膽DNA的損傷程度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),0#柴油濃度在50mg/L時,馬糞海膽的DNA出現(xiàn)了明顯的彗星拖尾現(xiàn)象,說明0#柴油濃度在50mg/L時會對馬糞海膽的DNA造成一定的損傷。同時,研究發(fā)現(xiàn)在50mg/L濃度下,暴露天數(shù)與細胞受損率、彗尾DNA百分含量(%DNAT)與DNA平均遷移長度之間具有良好的相關(guān)性。
　　 以0#柴油梯度濃度和暴露天數(shù)為變量條件,利用RAPD技術(shù),在分子水平上研究石油烴對馬糞海膽DNA的損傷程度。為

3、了找到最佳的反應(yīng)體系,篩選出擴增效果最好的隨機引物,得到更明顯的實驗效果并提供對照組數(shù)據(jù),首先運用RAPD技術(shù)對還未投毒的受試馬糞海膽進行遺傳多樣性分析。通過分析找到了適合馬糞海膽進行RAPD實驗的最優(yōu)反應(yīng)體系:25μL的RAPD反應(yīng)體系中,含Taq酶0.2μL、10×Buffer2.5μL、dNTP2μL、DNA模板1μL、引物1μL、ddH2O18.3μL。篩選出了15條擴增效果好的隨機引物,利用這些引物對27個馬糞海膽的DNA進行

4、擴增,共擴增出504條條帶,平均每個個體19條,擴增所得的條帶顯示,多態(tài)位點占75.4%,個體之間的遺傳距離為0.2189-0.5307,平均遺傳距離為0.3254,可見,馬糞海膽個體之間遺傳多樣性還是不錯的。然后對該馬糞海膽投毒,這次運用RAPD技術(shù)對投毒后的馬糞海膽進行DNA損傷的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),只有當(dāng)0#柴油濃度為50mg/L時,擴增條帶產(chǎn)生了明暗度的變化,其中由引物S49和S67擴增出的條帶變化尤為明顯,說明石油烴對馬糞海膽DN