熒光標(biāo)記共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建及其在DNA輻射損傷旁效應(yīng)檢測的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　建立研究電離輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞旁效應(yīng) DNA損傷的新的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停骄喀蒙渚€及低劑量的α粒子輻射產(chǎn)生的旁效應(yīng)DNA雙鏈斷裂（DSBs）和修復(fù)的效應(yīng)特征。
　　方法：
　　構(gòu)建定位于細(xì)胞胞漿中的帶有紅色熒光蛋白標(biāo)簽的pDsRed1-N1-Hspc300重組質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到人皮膚成纖維細(xì)胞（HFS）中，篩選出穩(wěn)定表達(dá)的HFS-RFP-Hspc300細(xì)胞系。將其中一種細(xì)胞進(jìn)行電離輻射（γ射線和低劑量的α粒子），另一種

2、細(xì)胞作為輻射旁效應(yīng)細(xì)胞，把兩種細(xì)胞混合培養(yǎng)，在不同的時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞，利用免疫熒光共聚焦反應(yīng)，觀察鏡下輻照細(xì)胞和旁效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)γH2AX的foci個(gè)數(shù)，從而探究細(xì)胞輻射旁效應(yīng)的DNA損傷和修復(fù)情況（主要是DNA的雙鏈斷裂損傷（DSBs））。
　　結(jié)果：
　　1．建立了HFS-RFP-Hspc300細(xì)胞和HFS細(xì)胞共培養(yǎng)的細(xì)胞DNA損傷輻射旁效應(yīng)研究實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　2．2Gy60Coγ射線照射細(xì)胞混合后，直接受照射的

3、HFS細(xì)胞與旁效應(yīng)細(xì)胞HFS-RFP細(xì)胞γH2AX的數(shù)目變化情況相似，均在照射后30min出現(xiàn)最大值，隨后慢慢降低，照后各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較均有顯著性差異（P<0.05）。
　　3．不同低劑量的α粒子照射，直接受照細(xì)胞 HFS-RFP和旁效應(yīng)細(xì)胞 HFS中的γH2AX簇集點(diǎn)數(shù)隨時(shí)間變化的趨勢相似，均在照后1h達(dá)到高峰，并且24h 時(shí)還是和0h的情況有顯著性差異（P<0.05）。輻照細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)的比較，在30min、2h