新城疫內(nèi)蒙古地方分離株F基因比較研究.pdf

1、本試驗(yàn)提取雞新城疫病毒（NDV）內(nèi)蒙古地區(qū)4株分離株（NM1、NM2、NM3和NM4） RNA，參考GenBank中已發(fā)表的NDV F基因序列，設(shè)計(jì)出用于擴(kuò)增F基因的引物，應(yīng)用RT—PCR技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增4株內(nèi)蒙古地區(qū)分離株的F基因。將純化的目的DNA與PMD19—T載體連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，提取質(zhì)粒，分別用PCR法、酶切法進(jìn)行質(zhì)粒鑒定，將鑒定為含有陽性質(zhì)粒的菌液送寶生物工程（大連）有限公司測定基因序列。利用DNAStar6.0軟件繪制

2、系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，確定基因型，并與參考毒株的核苷酸及相應(yīng)氨基酸序列進(jìn)行比較。 結(jié)果表明，成功地?cái)U(kuò)增出了4株NDV分離株F基因1662bp的核苷酸片段。4分離株間核苷酸同源率在93.6％～98.0％之間，與國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F48E9的核苷酸序列同源率為85.8％～86.8％；和LaSota的核苷酸同源率為83.0％～83.6％；與Ⅶ型代表毒株Taiwan95的同源率在93.8％～94.3％；推導(dǎo)的氨基酸序列分析顯示，4分離株間氨基酸同

3、源率在95.1％～98.5％之間：并且4分離株F蛋白的裂解位點(diǎn)氨基酸組成為112R—R—Q—K—R—F117，具有典型的強(qiáng)毒株裂解位點(diǎn)的特點(diǎn)；從進(jìn)化樹上看，NM2、NM3與Guangxi/2002、JS—7—01—GO、SF02、YN—PA01同屬于一個(gè)進(jìn)化分支，氨基酸同源率為99.7％； NM1、NM4和TW—01—05同屬于一個(gè)進(jìn)化分支，氨基酸同源率為98.1％；同時(shí)這9株毒株又與Taiwan95處于一個(gè)大的進(jìn)化分支上。并且具有典型