新城疫貴州不同分離株的蝕斑克隆與毒力鑒定.pdf

1、新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒引起的一種急性、高度接觸性禽類傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)定為A類傳染病。目前國內對于新城疫的診斷，主要是采用傳統(tǒng)的病原分離鑒定及血凝抑制(HI)等血清學試驗，雖為大家所公認，但這些方法費時、費力。本文主要開展了RT-PCR技術檢測新城疫病毒和鑒別新城疫強弱毒株的研究及蝕斑克隆技術純化NDV，為我省對新城疫的快速準確診斷奠定了技術基礎。 1.應用RT-PCR

2、試驗，鑒定NDV及其強弱毒株 采用有關文獻設計合成的針對NDV F蛋白的3對引物，對15株NDV進行RT-PCR試驗，鑒定NDV及其強弱毒株。三對引物分別對15株NDV分離株進行鑒定，其結果與傳統(tǒng)毒力測定結果一致，該方法可以用于ND的診斷和NDV強弱毒株的鑒定。 為了將RT-PCR及上述引物應用于新城疫的臨床診斷并推廣，使之具有更廣泛的應用價值，我們采用該方法對貴州的13例禽類送檢病例進行鑒定。結果表明：RT-PCR可直

3、接對病料進行檢測，能在6h內確診并區(qū)分NDV強弱毒株，其病毒檢出率為15.38％(2/13)，與病毒分離率15.38％(2/13)完全相符。RT-PCR應用于臨床診斷具有準確、快速的特點，克服了傳統(tǒng)方法的不足。 2．利用蝕斑克隆技術對ND毒株進行純化 對2株NDV貴州分離株(GN、ND99)及2株疫苗毒株(Ⅰ系和Ⅱ系)進行挑斑純化，結果得到12株克隆毒。經RT-PCR技術檢測，7株為弱毒，形成蝕斑的大小在0.3～1.0m

4、m；5株為強毒，其中4株形成蝕斑的大小在1.0～2.0mm，1株為形成蝕斑的直徑為0.4mm的紅色蝕斑；在胰酶存在的情況下，低毒力和中等毒力的NDV在雞胚成纖維細胞上都能形成蝕斑，所形成蝕斑的大小與病毒毒力具有相關性。 3．新城疫毒株毒力譜的構建 通過傳統(tǒng)毒力指數測定結果和針對HN蛋白單克隆抗體的分群研究，結合RT-PCR對NDV貴州分離株的鑒定，綜合評價不同現場流行毒株的毒力，構建新城疫病毒分離物的毒力譜如下：