中國胃癌her2檢測指南解讀鄭杰

1、概述,本指南推薦IHC與FISH和（或）DSISH相結(jié)合的檢測策略胃癌有必要進行準確的HER2檢測HER2狀態(tài)檢測首先選用免疫組織化學法（IHC）IHC 3+的病例視為HER2陽性IHC 2+的病例建議進一步行原位雜交（ISH：FISH和或DSISH）檢測，IHC 2+/ISH+的病例視為HER2陽性IHC 1+和IHC 0 病例，IHC 2+/ISH - 病例視為HER2陰性胃癌HER2檢測應(yīng)在有能力的實驗室進

2、行檢測質(zhì)量取決于標本的采集、處理過程、IHC/ISH 檢測方法和評判標準的執(zhí)行,問題一,1. 請問您所在的醫(yī)院胃癌HER2檢測是否屬于常規(guī)檢測項目？是否不清楚,問題二,請問您所在的醫(yī)院，由誰決定是否做胃癌HER2免疫組化檢測？病理科外科腫瘤內(nèi)科消化內(nèi)鏡室,問題三,請您對多學科合作對胃癌HER2檢測的重要性打分（0-5重要性逐漸遞增），請按投票器選擇0 12345,胃癌HER2檢測,,,,,,,,,,,,,切

3、片,,,,,,,,,,,脫水包埋,,,,,,固定,,,,,,,HER2檢測的相關(guān)流程,切片,檢測,判讀,標本收取,問題四,貴單位胃癌手術(shù)標本送到病理科處理的時間？A 30分鐘內(nèi)B 1小時內(nèi)C 2小時內(nèi)D >2小時E 不清楚,問題五,貴單位手術(shù)標本固定時間？不固定直接取材固定時間在8小時內(nèi)固定時間在12小時左右（過夜）固定時間12-24小時不清楚,標本類型,原發(fā)病灶的手術(shù)切除標本原發(fā)病灶的胃鏡

4、活檢標本建議取6-8塊，以獲得足夠的樣本組織，多點活檢對準確的檢測有必要切除標本離體后20–30分鐘內(nèi)進行標記、切開、固定等初步處理后，及時送病理科活檢標本的大小≥2x2x2mm3原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，建議使用手術(shù)切除組織進行檢測,標本采集,問題六,貴單位送檢標本采用何種固定液？不用固定液，直接送病理科10%福爾馬林固定液（蒸餾水配）10%福爾馬林固定液（中性緩沖液配）10%甲醛固定液不清楚,標

5、本固定,采用新鮮配制10%中性緩沖福爾馬林作為固定液固定液的量應(yīng)為組織的10倍手術(shù)切除標本的固定時間為8–48h (至少1h/mm組織)活檢標本的固定時間不超過24h (至少1h/mm組織)不宜使用其它固定液，非10%中性緩沖福爾馬林制劑可能會妨礙IHC和ISH檢測的可靠性不宜用微波快速固定組織,規(guī)范的標本固定是HER2檢測質(zhì)量的保障；保存良好的組織形態(tài)，防止細胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失,標本準備,固定1小時,固定52小時,固定4小

6、時,固定2周,固定時間影響HER2染色結(jié)果,固定22小時,圖片由 of A Morey, St Vincent’s Hospital, NSW, Australia提供,固定較差示例：乳腺癌HER2 IHC檢測,固定較差會導致染色結(jié)果的異質(zhì)性胞質(zhì)染色可能是由固定較差導致,圖片由 W Hanna提供,固定較差示例：胃癌HER2 IHC檢測,固定不完全會導致假陽性檢查結(jié)果胞質(zhì)染色可能由于使用了不恰當?shù)墓潭ǚ绞?圖片

7、由Targos Molecular Pathology.提供,固定較差示例：HER2 ISH檢測,圖片由 Abbott/Vysis.提供,固定不完全 - SISH，“空核”,固定不完全導致探針信號較弱或缺失,過度染色會導致持續(xù)性自發(fā)熒光 探針信號可能較弱或缺失,HER2檢測,HER2過表達的檢測,HER2擴增的檢測,,,免疫組織化學染色方法（IHC） 自動化,原位雜交方法 （ISH） FISH Dual SISH,實驗室總體要求

8、,應(yīng)當在有條件的實驗室進行，擁有試驗所需的儀器和設(shè)備及空間條件實驗室掌握包括標本的制備、抗體的選擇、抗原修復方法及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測預處理方法及其它相關(guān)技術(shù)實驗室經(jīng)過嚴格的內(nèi)部和外部質(zhì)量控制程序驗證，建立完善的實驗室標準操作流程（SOP） 實驗室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過合格培訓,HER2檢測-IHC,IHC方法 試驗方法根據(jù)實驗室條件可以選擇手工染 色、半自動染色和全自動免疫組化染色 建議使用全自動染

9、色方法,建議使用我國相關(guān)部門（SFDA）批準的試劑盒 自行組配和分裝的抗體必須經(jīng)過嚴格的內(nèi)部和外部質(zhì) 量控制程序驗證，并與權(quán)威機構(gòu)批準的檢測試劑盒進 行比對，以保證檢測結(jié)果的可靠性,IHC抗體,結(jié)果判讀和分析,普通光學顯微鏡,熒光顯微鏡,病理醫(yī)生需要經(jīng)過培訓 IHC評分標準和乳腺癌有所不同 樣本：活檢組織和切除組織有所不同 觀察：高異質(zhì)性需要全面觀察所有腫瘤組織 溝通：結(jié)果不確定時需要與腫瘤科醫(yī)生溝通,

10、IHC判讀標準（參照ToGA經(jīng)驗，所有圖片來自SCC）,0 無反應(yīng)或腫瘤細胞膜染色<10%,1+ ≥10%腫瘤細胞微弱或隱約膜染色，細胞膜僅部分區(qū)域著色,2+ ≥10%腫瘤細胞弱到中度的完全或細胞基底部和兩側(cè)邊膜染色,3+ ≥10%腫瘤細胞完全性或基底部和兩側(cè)邊膜強染色（對3+的病例同時表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）,IHC結(jié)果判讀時應(yīng)注意：細胞質(zhì)著色應(yīng)忽略不計，正常胃黏膜上皮細胞不應(yīng)著色,,HER2檢測-IHC,原位

11、雜交檢測方法（ISH） 熒光原位雜交（FISH ） 雙色銀染原位雜交（Dual SISH， DSISH）探針建議使用我國相關(guān)部門（SFDA）批準的試劑盒,FISH，HER2紅色信號增多，局部呈簇狀，CEP17信號1-2個，比值7.2，有擴增（100×）,FISH，HER2和CEP17信號各1-2個，比值1.65，無擴增（100×）,FISH：嚴格按照試劑盒標準程序執(zhí)行,HER2檢測-FISH,圖片

12、來自SCC,DSISH HER2黑色信號擴增，呈簇狀；CEP17紅色信號1-2個；比值15，有擴增(100×),DSISH HER2和CEP17信號各1-2個，比值<0.8，無擴增(100×),DSISH：實驗室應(yīng)先進行嚴格的對比試驗和程序優(yōu)化 嚴格按照所用全自動染色儀器的優(yōu)化程序和SOP執(zhí)行,HER2檢測-DSISH,圖片來自SCC,請問貴院是否有統(tǒng)一的HER2檢測病理報告格式？

13、是否,問題七,檢測報告內(nèi)容,胃癌HER2 IHC/ISH檢測報告臨床信息： 姓名 性別 年齡 門診／住院號 送檢醫(yī)師聯(lián)系方式 檢測日期 年 月 日標本信息： 病理號/蠟塊號 標本類型： 手術(shù)切除□ 活檢□腫瘤部位： 胃食道交界處□ 胃底□ 胃

14、體□ 胃竇□ 幽門管□ 轉(zhuǎn)移灶□標本固定液種類（10％中性緩沖福爾馬林）是□否□標本離體至固定時間(如有記錄) 分鐘標本固定的時間(如有記錄) 分鐘組織學類型/分級 Laurén分型 臨床分期 T N M,HER2 IHC 檢測報告,檢測信息：抗體信息(克隆號／生產(chǎn)商) 檢測方法 手工/半自動 □全自動 □

15、對照設(shè)置情況 3+ □ 0 □樣本量是否足夠用于評估是□否□具有膜著色的腫瘤細胞的百分比 %著色的異質(zhì)性有□無□腫瘤細胞膜染色模式 完整□ 基底和側(cè)膜（U-shaped)□ 兩者皆有□判讀結(jié)果：0 □ l+ □ 2+ □ 3+ □ 無法判讀□結(jié)論：陽性□；不確定□；陰性□；無法判讀□檢測人員：技術(shù)員

16、 病理醫(yī)師,HER2 ISH 檢測報告,檢測信息：探針信息(生產(chǎn)商/商品號) 檢測方法 對照設(shè)置情況 陽性對照□ 陰性對照□ 樣本量是否足夠用于評估是□否□IHC檢測結(jié)果0 □ l+ □ 2+ □3+ □無法判讀□判

17、讀結(jié)果： 用于評估的腫瘤細胞數(shù)量 HER2信號總數(shù)／CEPl7信號總數(shù) HER2信號數(shù)平均值／細胞核 CEPl7信號數(shù)平均值／細胞核 17號染色體是否為多體是□否□結(jié)論： 陽性(擴增) □ 陰性(無擴增) □ 無法判讀 □檢測人員：技術(shù)員

18、 病理醫(yī)生,實驗室質(zhì)量控制 （1）,HER2蛋白和基因擴增的檢測均應(yīng)在內(nèi)、外部質(zhì)量控制良好的病理實驗室進行檢測必須嚴格按照指南要求執(zhí)行，以保證結(jié)果可靠不具備HER2檢測條件的單位應(yīng)按照指南要求，妥善處理和準備好標本，提供給有質(zhì)量保證的病理實驗室進行檢測,實驗室質(zhì)量控制 （2）,實驗室內(nèi)、外部質(zhì)量控制和SOP的主要要求如下準備開展GC HER2檢測的實驗室應(yīng)選擇1～2家已較好開展該項檢測的實驗進行25～100例標本的對比驗證或通過

19、參加有關(guān)外部質(zhì)量控制活動來實現(xiàn)，外部質(zhì)控陽性和陰性結(jié)果的一致性應(yīng)達到90％以上，每年應(yīng)進行1～2次從事GC HER2檢測的實驗室技術(shù)人員和病理醫(yī)師應(yīng)進行必要的培訓和資格考核,實驗室質(zhì)量控制 （3）,實驗室應(yīng)建立完善的SOP，并做好每次檢測情況的記錄和存檔工作任何改變操作程序和試劑的行為均應(yīng)重新進行嚴格的驗證內(nèi)部質(zhì)控應(yīng)包括同一組織不同批次染色結(jié)果的重復性分析，每次染色陽性、陰性對照的設(shè)置，如有可能還應(yīng)沒置包括低表達／低擴增對照檢測

20、相關(guān)的儀器和設(shè)備需定期維護、校驗,,類似乳腺癌亮視野檢測方法有優(yōu)勢,Her2檢測流程,樣本收集,鏡下觀察,異質(zhì)性高需要觀察整張切片,,檢測所需時間,胃癌進展快，宜及時獲得結(jié)果多學科參與,結(jié)果判讀,與乳腺癌有所不同,,,胃癌HER2檢測： 基本過程和特殊性,數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫瘤組織的活檢標本 具有代表性的手術(shù)切除標本,多學科協(xié)作共同努力 醫(yī)生和技術(shù)員知識更新和觀念改變 患者和醫(yī)生,多學科協(xié)作檢測HER2：臨床醫(yī)生之角

21、色,采樣 手術(shù)和胃鏡活檢（6-8塊組織） 固定 10%中性緩沖福爾馬林樣本送檢（離體時間）30分鐘結(jié)果解讀 HER2 + IHC 0 1+ 2+ 3+ HER2 陽性,多學科協(xié)作檢測HER2：病理醫(yī)生之角色,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118–145.,檢測

22、結(jié)果分析檢查備檢標本是否可用正確設(shè)立內(nèi)部對照組依照國際評分系統(tǒng)進行評分檢測結(jié)果報告使用標準化HER2檢測結(jié)果報告表報告內(nèi)容應(yīng)包括標本取樣，固定，檢測方法及評分系統(tǒng)多學科檢測治療小組(MDT)會議,學科協(xié)作檢測HER2：技術(shù)員之角色,處理: 避免影響檢測結(jié)果之因素-- 最佳固定時間及固定方法-- 石蠟包埋-- 組織切片的合理時間 (最好于HER2檢測前切片)-- 標本脫蠟方法: 使用標準化/經(jīng)驗證之檢測步驟